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目的:设计并筛选小鼠N-cadherin 基因有效RNA 干扰片段，构建干扰质粒；干扰抑制N-cadherin 基因表达，同时研究N-cadherin 基因表达降低时对GDNF 介导的MN9D 细胞突起生长和6-OHDA 诱导细胞凋亡的影响。
方法:使用公用网站设计、筛选符合公开文献筛选参数的序列3 条以及阴性对照序列1 条，由上海英俊技术有限公司合成。与pSilencer 3.1-H1 hygro 质粒重组后，分别命名为质粒pSi-cad 1、pSi-cad 2、pSi-cad 3 和pSi-control。转染大肠杆菌感受态细胞。阳性克隆经DNA 测序鉴定后，用半定量RT-PCR 和Western blot 方法进行靶点的筛选。筛选的N-cadherin 有效干扰质粒pSi-cad 3 转染多巴胺能神经细胞MN9D 细胞。接着检测RNA 干扰后分别在GDNF 作用和6-OHDA 处理情况下细胞突起生长和凋亡率变化。干扰48 hr 后予GDNF 预处理，IPP(Image Pro Plus)软件测定细胞突起长度；干扰48 hr 后6-OHDA 诱导细胞凋亡，流式细胞仪测定转染pSi-cad 3 质粒和阴性对照质粒及空白组细胞凋亡率。
结果:DNA 测序鉴定显示重组质粒中含有所设计的寡核苷酸双链，序列正确。转染48h 后，阴性对照质粒的MN9D 细胞中N-cadherin 表达未受影响，而转染质粒pSi-cad 3 的MN9D细胞中N-cadherin 的mRNA及蛋白质表达水平显著下降（50％），提示小干扰RNA 介导的N-cadherin 序列特异性基因沉默。在GDNF 介导MN9D细胞突起生长作用研究中，干扰组和阴性质粒对照组及空白组平均细胞突起长度分别为，对照组和空白组分别为49.5 ± 7.9 μm、50.0 ± 7.1 μm，而干扰组降低为43.2± 5.9 μm。转染48 h 后行6-OHDA 诱导细胞凋亡。流式细胞仪测定显示，空白对照组和阴性质粒对照组凋亡率为38.5 ％和39.0 ％，而干扰组凋亡率增高为42.5 ％。
结论：成功设计筛选了小鼠N-cadherin 基因的有效干扰片段，并成功构建了其干扰载体。N-cadherin 介导GDNF 促进多巴胺能神经细胞突起生长并拮抗6-OHDA诱导的细胞凋亡。