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目的构建能够稳定表达B型流感病毒血凝素蛋白的细胞系,为乙型流感病毒的免疫学研究提供靶细胞以及为新型疫苗的研发奠定基础。方法在MDCK细胞扩增Victoria系乙型流感病毒,提取乙流病毒RNA并以其为模板,RT-PCR及PCR反应扩增乙型流感病毒的血凝素蛋白(Hemagglutinin,HA)的基因序列。HA基因片段双酶切后克隆到pc DNA3.1(+)真核表达载体上,获得重组质粒pc DNA3.1(+)-HA。经PCR、双酶切及测序鉴定正确后的重组质粒和辅助质粒PLV-EF1a-EGFP(2A)Puro用脂质体介导法双质粒共转染HEK293细胞。转染后的细胞用含有嘌呤霉素浓度为0.5μg/m L的培养基进行加压筛选三周,筛选后通过有限稀释法获得单克隆细胞株。单克隆细胞扩大培养后进行流式细胞术、间接免疫荧光和Western Blot实验分析筛选得到的细胞株中HA蛋白的表达状况。筛选得到的阳性重组细胞经含最适筛选浓度的培养基中连续传代培养15代后,选用IFA与基因组PCR实验方法来鉴定血凝素蛋白表达及基因遗传的稳定性。稳定细胞株与筛查出含有人的乙型流感病毒中和抗体的血清进行反应,再使用流式细胞仪进行结果检测分析。结果通过RT-PCR及PCR反应扩增得到HA基因序列,经测序后证明了扩增得到的序列与设计合成的HA基因序列相一致。重组质粒pc DNA3.1(+)-HA经鉴定正确后证实了HA目的基因片段成功克隆至真核载体上。在转染后经特异性抗生素筛选经流式鉴定后保留高表达量的阳性细胞株,经间接免疫荧光和蛋白免疫印记结果显示了重组蛋白的特异性。在连续15代的传代培养后经间接免疫荧光法及PCR反应都能检测到HA蛋白的表达与基因的稳定遗传。流式检测得到的细胞与血清中抗体的结合反应结果具有统计学意义。结论成功构建得到表达乙型流感病毒血凝素蛋白(HA)的细胞株,HEK293细胞株可以稳定表达有免疫学活性的乙型流感病毒HA抗原于细胞表面,为以后乙型流感病毒的血凝素蛋白的功能研究打下良好的基础。