塞来昔布联合多西他赛抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和诱导凋亡的作用研究

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目的体外研究塞来昔布(celecoxib)联合多西他赛(docetaxel)抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和诱导凋亡的作用,研究其在诱导细胞凋亡过程中对bax、bcl-2、survivin蛋白表达的影响,分析其诱导凋亡的可能机制,为进一步应用于临床提供实验依据。方法实验分为对照组、塞来昔布组、多西他赛组和联合用药组。1.MTT法检测细胞生长的活力,并绘制增殖抑制曲线;用两药相互作用系数(CDI)来评价两药相互作用性质,CDI按下列公式计算:CDI=AB/A×B,其中AB是两药联合组与对照组OD值的比值,A或B是各单药组与对照组OD值的比值。CDI<1,表明两药作用性质为协同;CDI=1,则两药作用性质为相加;CDI>1,则两药作用性质为拮抗;2.瑞氏-吉姆萨染色观察细胞形态学变化;3.流式细胞仪分析细胞凋亡情况;4.Western blot测定bax、bcl-2、survivin蛋白的表达情况;结果1.塞来昔布及多西他赛单药均能抑制MDA-MB-231细胞的增殖,呈剂量-时间依赖性,联合组的细胞抑制作用更明显,差异有统计学意义(P<0.05),且联合组作用细胞48h后协同因子(CDI)均<1;2.60umol/L塞来昔布和2.0umol/L的多西他赛单药及联合作用细胞48h后,200倍光镜下观察到联合组细胞表现为染色质固缩、胞核碎裂及凋亡小体等典型的凋亡形态;3.药物作用于细胞48h后,60umol/L塞来昔布组细胞凋亡率为(20.14±1.22)%、2.0umol/L多西他赛组为(54.60±1.37)%,联合用药组为(59.89±1.42)%,差异有统计学意义(F=1395.96,P=0.00);4.Western Blot结果显示,60umol/L塞来昔布组、2.0umol/L多西他赛组和联合用药组作用于细胞48h后,bcl-2表达分别下降至对照组的89.02%、75.63%、45.35%,差异有统计学意义(X~2=13.77,P<0.05);survivin表达下降至对照组的80.42%、54.28%、35.85%,差异有统计学意义(X~2=10.28,P<0.05);bax表达上调至对照组的136.35%、157.24%、173.89%,差异有统计学意义(X~2=4.79,P<0.05)。结论塞来昔布和多西他赛单药及联合应用均能抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,诱导乳腺癌细胞凋亡,呈时间-剂量依赖性,两者具有协同性,其机制可能与下调bcl-2、survivin及上调bax蛋白有关。
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