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研究背景:自身免疫性疾病（autoimmunediseases，AID）是由于正常免疫自稳失衡，机体免疫系统（免疫组织或和免疫器官）对自身组织成分产生免疫应答而导致自身器官功能障碍和组织损害所引起的疾病。免疫系统在健康个体发挥着维持机体免疫生理稳态的作用，一旦免疫系统对机体内自身抗原发生正性应答，将造成免疫组织或免疫器官的病理性损伤，进而影响到机体的免疫生理稳态，最终可能导致各种临床症状。AID发生机制较为复杂，有研究表明细胞凋亡异常与其密切相关，有效促进T细胞凋亡是维持机体免疫稳态，纠正自身免疫反应的一个重要因素[1]。自身免疫性疾病主要包括类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、I型糖尿病、桥本氏甲状腺炎、重症肌无力等一系列免疫性疾病。
微小RNA(MicroRNAs，miRNAs)是一类长度约21～25个核苷酸的内源性单链非编码小RNA分子，广泛存在于多细胞生物体内，主要通过核酸序列互补匹配结合到特定的靶mRNA上，抑制靶mRNA翻译过程或降解靶mRNA，主要起到负向调控作用。大量的研究证实miRNAs参与机体的发生、发育等多种生物学进程，部分miRNAs异常表达导致临床疾病，包括自身免疫反应。miRNA参与调节机体各个免疫过程，已是一个不争的事实，有可能成为多种疾病诊断的生物学标志物或治疗靶点。最新的研究表明miR-125b和miR-34a参与T细胞、B细胞和巨噬细胞的发育、分化、活化、增殖和稳态的维持等生物学过程。而自身免疫性疾病均存在着抗原提呈细胞（antigenpresentingcells，APCs）活化和抗原提呈，以及T和B细胞的活化、增殖、分化等过程，因此我们推测两种miRNA可能参与自身免疫病的发病过程。本研究选择了系统性红斑性狼疮和类风湿关节炎患者作为研究对象，探讨miR-34a和miR-125b及其上、下游相关基因与自身免疫性疾病的相关关系，为进一步阐明其与自身免疫病的发生、发展机制奠定基础。
第一部分：类风湿关节炎患者PBMCs中miR-34a和miR-125b的表达及临床意义
目的:本研究主要探讨RA患者PBMCs中miR-34a和miR-125b的表达水平并与其临床指标进行相关分析;从Treg/Th17平衡入手，检测Foxp3和RORγt的表达水平，研究类风湿关节炎患者的免疫应答特征，以期阐明miRNA与Th细胞亚型功能失衡的特征;同时检测miR-34a、miR-125b上、下游的靶基因blimp-1、IRF-4和P53的表达水平，探讨miR-34a、miR-125b在类风湿关节炎中的作用及可能的机制。
方法:35例RA患者及39名健康对照人群，用实时荧光定量RT-pCR分析RA患者外周血单个核细胞中miR-34a、miR-125b的表达水平和blimp-1、IRF-4和P53的表达水平，以及Treg/Th17的转录因子Foxp3/RORγt的表达水平，分别分析miR-34a、miR-125b与其靶基因blimp-1、IRF-4和P53以及Foxp3、RORγt的相关性及与病情活动的相关性。
结果:
1、RA患者miR-34a及miR-125b的表达水平均低于健康对照组，(P＜0.001);
2、RA患者blimp-1、IRF-4、RORγt和P53均高于健康对照组，(P＜0.05）;而Foxp3与健康对照组相比，表达水平下调，(P＜0.05);
3、RA患者外周血PBMCs中miR-34a与blimp-1、IRF-4、RORγt和P53均呈负相关，(P＜0.05）;而与Foxp3呈正相关，(P＜0.05);miR-125b的表达水平与blimp-1、IRF-4、RORγt和P53的表达水平均呈负相关，(P＜0.05）;而与Foxp3无显著相关，(P＞0.05);
4、miR-34a和miR-125b均与类风湿因子（RF）呈显著负相关，(P均＜0.05);miR-34a与C反应蛋白(CRP)和抗O抗体(ASO)呈显著正相关，(P均＜0.05);但与血沉(ESR)和抗CCP抗体不相关，(P＞0.05);miR-125b的水平与其相应的CRP和ESR呈显著正相关，(P均＜0.05）;但与ASO和抗CCP抗体无显著相关，(P＞0.05）;
结论:RA患者PBMCs中miR-34a、miR-125b的表达水平均下调;blimp-1、IRF-4、RORγt和P53的表达水平均高于健康对照组，而Foxp3则异常低表达。
第二部分：SLE患者miR-34a和miR-125b的表达及临床意义
目的:本研究主要探讨SLE患者PBMCs中miR-34a、miR-125b的表达水平并与其临床指标进行相关分析，同时检测blimp-1、IRF-4、P53、RORγt和Foxp3的表达水平，初步探讨miR-34a、miR-125b在SLE中可能的作用机制，为更深入地了解SLE的发病机制提供一定的思路和线索。
方法:23例SLE患者及30名健康对照人群，采用RT-PCR分析SLE患者外周血单个核细胞中miR-34a、miR-125b的表达水平及blimp-1、IRF-4、RORγt、Foxp3和P53的表达水平，分析miR-34a、miR-125b与病情活动的相关性。
结果:
1、SLE患者PBMCs中miR-34a的表达水平高于健康对照组，(P＜0.05);而miR-125b的表达水平低于健康对照组，(P＜0.05);
2、SLE患者PBMCs中blimp-1、P53、RORγt和Foxp3的表达水平均低于健康对照组，(P＜0.05);而IRF-4的表达水平高于健康对照组，(P＜0.05);
3、SLE患者PBMCs中miR-34a和miR-125b的表达水平均与RF、ESR、CRP和ASO呈正相关，（P均＜0.05）;miR-125b的表达水平与C4呈显著正相关，(P＜0.05）;而miR-34a的表达水平与C4不相关，(P＞0.05）;
结论:SLE患者miR-34a的表达水平上调，而miR-125b的表达水平下调，blimp-1、P53、RORγt和Foxp3的表达水平均下调，而IRF-4的表达水平上调。
第三部分：miR-34a和miR-125b在自身免疫反应中的表达
目的:本研究主要探讨正常人单核细胞、non-T细胞、CD3+CD4+T细胞、CD3+CD4-T细胞活化前后miR-34a和miR-125b的表达水平改变。
方法:
1、密度梯度离心分离正常人的外周血单个核细胞，贴壁半个小时，分离出单核细胞，磁珠分离CD3+T、CD4+T细胞。
2、活化细胞，单核细胞与Non-T细胞用200ng/ml的LPS活化，CD3+CD4+T细胞与CD3+CDMT细胞用单抗CD3，CD28活化。
3、流式细胞仪检测分离出来的CD3+T细胞的纯度。
4、用荧光定量PCR检测活化前后单核细胞、non-T细胞、CD3+CD4+T细胞、CD3+CD4-T细胞中miR-34a和miR-125b的表达水平
结果:与活化前相比，单核细胞、non-T细胞、CD3+CD4+T细胞、CD3+CD4-T细胞中miR-34a的表达水平上调，单核细胞、non-T细胞CD3+CD4+T细胞活化后miR-125b的表达水平上调，而CD3+CD4-T细胞活化后miR-125b的表达水平下调。
结论:单核细胞、non-T细胞和CD3+CD4+T细胞化后miR-34a和miR-125b的表达水平均上调;CD3+CD4-T细胞活化后miR-34a的表达水平上调，miR-125b的表达水平下调。