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背景:肿瘤干细胞在肿瘤发生、发展过程中起重要作用。针对肿瘤干细胞的免疫靶向治疗,为肿瘤治疗提供了一种新的策略。CD47属于免疫球蛋白家族成员之一,广泛表达在细胞膜表面,特别是在肿瘤细胞中高表达。CD47与巨噬细胞表面的信号调节蛋白α(SIRPα)相结合,传递“不要吃我”的抑制性信号来逃避巨噬细胞的吞噬,进而抑制机体免疫系统功能。因此,应用抗CD47单克隆抗体阻断CD47-SIRPα信号通路,能够提高靶向杀伤肿瘤细胞的能力。然而,CD47在胶质瘤干细胞中的表达及其作用与机制,目前为止尚未明晰。目的:探讨抗CD47单克隆抗体对胶质瘤细胞/胶质瘤干细胞的体内外治疗作用与机制,为胶质瘤的免疫治疗提供有效靶点。方法:应用实时荧光定量聚合酶链式反应、流式细胞术以及Western Blot技术检测CD47在胶质瘤细胞/胶质瘤干细胞、胶质瘤组织中mRNA和蛋白的表达情况。利用免疫组化技术检测胶质瘤组织、正常脑组织中CD47表达情况,并分析与临床病理因素及生存预后的关系。流式分选CD47+和CD47-胶质瘤细胞后,通过一系列细胞功能实验检测CD47+细胞的干性特征。为进一步探讨CD47在胶质瘤细胞中的生物学功能,利用慢病毒载体稳定干扰CD47在胶质瘤细胞中的表达,通过一系列细胞功能实验检测其干性特征变化。在体外实验,利用巨噬细胞吞噬实验和乳酸脱氢酶(LDH)释放实验分别检测抗CD47单抗治疗是否能够增强巨噬细胞对肿瘤细胞/肿瘤干细胞的吞噬以及细胞毒性作用。同时,利用流式检测抗CD47单抗对胶质瘤细胞/胶质瘤干细胞凋亡的影响。在体内实验,通过输注胶质瘤细胞/胶质瘤干细胞建立小鼠胶质瘤模型,腹腔注射抗CD47单抗并进行疗效分析。最后,应用巨噬细胞吞噬实验、组织病理染色,检测抗CD47单克隆抗体的安全性。结果:胶质瘤组织中CD47 mRNA的表达量明显高于癌旁组织(P<0.0001)。CD47在多种胶质瘤细胞中均有表达(++),尤其是胶质瘤干细胞中高表达(+++)。胶质瘤组织中CD47较正常脑组织的表达明显上调,且与肿瘤级别呈正相关(P<0.0001),与患者的年龄、性别以及肿瘤体积无显著性差异。体内外实验结果表明,CD47+的胶质瘤细胞具有肿瘤干细胞的特征,CD47干扰后,肿瘤细胞的干性特征明显减弱。抗CD47治疗后,能够明显增强巨噬细胞对胶质瘤细胞/胶质瘤干细胞的吞噬(P<0.001)和杀伤活性(P<0.001)。体内实验结果表明,在小鼠原位胶质瘤模型中,抗CD47单抗能够明显抑制C57BL/6小鼠颅内肿瘤生长(P<0.05)且生存期明显延长(P<0.001)。同样,在胶质瘤干细胞引发的胶质瘤模型中,抗CD47单抗能够明显抑制C57BL/6小鼠颅内肿瘤生长(P<0.05)且生存期明显延长(P<0.001)。安全性实验结果表明,治疗组除短暂性贫血外未见其他明显毒副作用。结论:抗CD47单克隆抗体治疗能够有效抑制胶质瘤细胞/胶质瘤干细胞的发生发展,为胶质瘤免疫治疗提供有效靶点。