MicroRNA-155对喉鳞癌细胞株Hep-2恶性行为的影响

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目的:探讨:microRNA-155(miR-155)过表达对喉鳞状细胞癌细胞株Hep-2增殖、迁移及凋亡方面的影响及其可能的作用机制。方法:1.将miR-155模拟物(miR-155mimics)瞬时转染至Hep-2细胞,以无义序列转染组(NC组)为阴性对照,以未经任何转染处理空白转染组(Blank组)为空白对照。2.荧光显微镜观察、测量转染效率。Real-time PCR检测不同转染组Hep-2细胞转染后miR-155表达水平。3.CCK-8法和平板克隆形成实验评价不同转染组Hep-2细胞的增殖能力。4.流式细胞术及Hoechst33342-PI双染法检测不同转染组LHep-2细胞的凋亡情况。5.划痕愈合试验检测不同转染组LHep-2细胞的迁移能力。6.统计学分析应用SPSS13.0统计软件,采用x±s描述定量资料,两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析(one-way ANOVA), P<0.05认为差异有统计学意义。结果:1.荧光显微镜下观察计数显示,转染24h后,miR-155mimics和无义序列转染入Hep-2细胞,其转染率均可达90%。2. Real-time PCR检测不同转染组转染24h后miR-155相对表达水平,miR-155组分别与Blank(?)及NC组相比miR-155表达明显增加(P<0.05),约16倍。3.CCK-8法显示1niR-155组细胞增殖能力更强,并且随着转染后培养时间的延长,细胞增殖速度更加明显(P<0.05)。4.平板克隆形成实验结果miR-155(?)且细胞集落数(832+49)明显高于Blank组(496+35)和NC组(488+39),差异具有统计学意义(P<0.05)。5.流式细胞术结果miR-155组细胞总凋亡率(0.139±0.022)明显低于Blank组(0.139±0.022)和NC组(49.23±11.21),差异具有统计学意义(P<0.05)。6. Hoechst33342-PI双染法结果示miR-155组细胞凋亡和坏死比例明显降低。7.划痕愈合试验显示划痕48h后,miR-155组细胞愈合率(83.14±12.73)明显高于Blank组(43.31+9.69)和NC组(488+39),差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:过表达miR-155可以促进喉鳞癌Hep-2细胞的增殖与迁移愈合能力,这可能与其抗凋亡作用有关。miR-155可能在喉鳞癌的发生发展中通过多种途径作为癌基因发挥功能。
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