基于致炎毒性及水通道蛋白的藤黄炮制减毒机理研究

来源 :上海中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:macgrady2006
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目的:  藤黄系藤黄科植物藤黄Garcinia hanburyiHook.f.所分泌的胶质树脂,有大毒,具有消肿排脓、散瘀解毒、杀虫止痒的功能。内服应用必须要经过炮制,制藤黄毒性明显降低。为了拓展藤黄在中医临床的应用,研究其内服的毒性及炮制减毒的机理是必要的。本课题选取生、制藤黄为研究对象,考察生、制藤黄对小鼠脾淋巴细胞活力的影响和巨噬细胞RAW264.7释放NO、TNF-α、IL-6和IL-10的影响。体内实验方面考察生、制藤黄对SD大鼠胃和十二指肠组织的病理表现,判断其毒性作用;基于水通道AQPs蛋白和mRNA的表达,探讨藤黄炮制减毒的机理。  方法:  1.样品制备:生藤黄(生品)将原药材拣去杂质,轧成粉末。清水制藤黄(制品)取生藤黄粗粉50g,放入烧杯内,加水10倍量,连续煮3h,浓缩至糊状,取出,低温干燥,制备得到炮制品清水制藤黄。  2.采用MTT法,检测藤黄生品和炮制品对小鼠脾淋巴细胞活力的影响。  3.采用ELISA法,检测小鼠巨噬细胞RAW264.7释放NO、TNF-α、IL-6和IL-10的影响。  4.采用HE染色法观察生、制藤黄对大鼠胃和十二指肠的影响。  5.采用免疫组化法检测给药后大鼠胃和十二指肠AQP3、AQP4和AQP8的表达。  6.采用实时荧光定量PCR检测给药后大鼠胃和十二指肠AQP3、AQP4和AQP8mRNA表达。  结果:  1.藤黄生品组能够显著促进脾淋巴细胞增殖,且促进作用呈一定的量效关系。藤黄炮制品促进脾淋巴细胞增殖作用减弱,在0.1、0.5 mg·L-1均能显著抑制脾淋巴细胞增殖。  2.藤黄生品组和制品组在3~100 mg·L-1浓度范围内,与阳性对照组对各种炎症介质的影响趋势一致,均可促进炎症介质NO、TNF-α、IL-6和IL-10的释放,且与剂量呈相关性;藤黄制品组与生品组比较,NO、IL-6和IL-10的释放量降低,TNF-α的释放量增加。  3.藤黄对胃和十二指肠组织有致炎性损伤,与给药剂量呈正相关。制藤黄的毒性明显降低,验证了藤黄炮制后毒性降低的传统炮制理论。  4.生藤黄可以上调AQP3、AQP4和AQP8蛋白在胃和十二指肠组织的表达,而同剂量制藤黄对AQP3、AQP4和AQP8蛋白表达的上调作用较生藤黄弱。  5.给药组AQP3、AQP4和AQP8 mRNA在大鼠胃和十二指肠组织均有表达,且均较空白对照组表达增加,制品组的表达低于生品组,与剂量呈正相关。  结论:  对炮制前后中药藤黄内服后的毒性进行了探讨,藤黄生品能够显著促进脾淋巴细胞增殖和巨噬细胞释放炎症介质NO、TNF-α、IL-6和IL-10。动物实验表明,藤黄生品可引起大鼠腹泻、白细胞升高、淋巴细胞降低,使胃黏膜充血水肿,十二指肠黏膜坏死和炎细胞浸润,从多个方面证明生藤黄对胃肠道的毒性为致炎毒性,藤黄炮制后可以降低炎症反应。水通道蛋白AQP3、AQP4和AQP8在胃和十二指肠的表达与炎症的严重程度呈正相关,炮制后的藤黄可以降低AQP3、AQP4和AQP8的表达。AQP3、AQP4和AQP8的表达降低是否是藤黄炮制后降低毒性的作用机制、炮制藤黄是否还有其它途径发挥减毒作用、炮制后的藤黄口服的疗效及安全给药剂量等问题,还需进一步研究探讨。
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