【摘 要】
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叶片衰老是一种内源性的细胞编程性死亡过程,最明显的特征是叶绿素的降解与光合能力的下降。叶绿素降解过快会导致品质与产量下降,延缓叶绿素降解能够延长籽粒灌浆期,从而提
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叶片衰老是一种内源性的细胞编程性死亡过程,最明显的特征是叶绿素的降解与光合能力的下降。叶绿素降解过快会导致品质与产量下降,延缓叶绿素降解能够延长籽粒灌浆期,从而提高产量。研究表明二倍体模式作物拟南芥与水稻的持绿基因(Stay-green,SGR)在叶绿素降解过程中起重要作用,但是关于多倍体作物小麦持绿基因的功能至今并无报道。本研究克隆了小麦持绿基因TαSGR的cDNA与基因组DNA,并将cDNA序列翻译成氨基酸序列进行了生物信息学分析,对TαSGR-5B进行了表达模式分析并构建了植物表达载体,对基因组DNA进行了序列分析并开发了功能标记,为TαSGR基因的功能验证和功能标记在辅助育种中的应用奠定了基础。主要研究结果如下:1.利用大麦基因HvSGR的序列在小麦基因组文库URGI上比对,分别得到小麦TαSGR在5A、5B、5D基因组上的候选序列。依据三个基因组候选序列之间的差异,设计基因组特异性引物,克隆得到TaSGTR的三个等位基因TαSGR-5A、TαSGR-5B与TαSGR-5D,均定位在小麦的第五条染色体长臂上,且基因的结构比较保守,氨基酸相似度高达95.48%,可能含有相应的保守结构域。2.TαSGR-5B基因在黑暗、外源ABA、及自然衰老的诱导表达量上调,在外源6-BA的诱导表达量下降。同时依据TαSGR-5B基因的编码区构建了两个植物表达载体,分别用于遗传转化与亚细胞定位。3.TαSGR的三个部分同源基因均包含三个外显子与两个内含子,其中TαSGR-5A编码区对应的基因组序列长1478bp,编码区长834bp,检测到2个SNP位点(G/C和G/A);TαSGR-5B基因编码区对应的基因组序列长1475bp,编码区长822bp,检测到2个SNP位点(C/T和G/T);TαSGR-5D基因编码区对应的基因组序列长1477bp,编码区长843bp,未检测到SNP位点,该序列保守。4.根据TαSGR-5A 基因序列的多态性开发了 5A 基因组的功能标记TαSGR-5A-dCAPS,根据TαSGR-5fB基因序列的多态性开发了 5B基因组的功能标记TαSGR-5B-CAPS。
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