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MicroRNA(miRNA)在动植物体内大量存在,并且参与调节植物生长发育及胁迫应答等过程,但关于柑橘抗寒资源—枳(Poncirus trifoliata)低温响应miRNA的研究目前还比较少。本论文在前期研究的基础上,验证了枳中鉴定出的一个低温诱导新microRNA(即ptr-miR04)的抗寒功能,并初步解析了它的调控机制。主要结果如下:1.利用pre-miR04前体转化的T2代转基因烟草植株进行低温处理,表型比较及生理指标(电导率、ROS等)分析表明转基因植株的抗寒性弱于野生型,暗示ptrmiR04负调控植物抗寒性。2.在柠檬中超表达pre-miR04得到了转基因阳性植株。低温处理后,发现转基因柠檬植株叶片萎蔫程度比野生型严重,而电导率、ROS的含量比野生型高,说明超表达ptr-miR04降低了植株抗寒性。利用STTM技术构建了ptr-miR04干涉载体并转化枳,得到了阳性植株。3.生物信息学预测ptr-miR04的靶基因,发现其中一个靶基因为果糖-1,6-二磷酸醛缩酶(fructose-bisphosphate aldolase,FBA),低温处理后对枳pre-miR04和FBA进行表达量分析,结果表明两者呈现负相关性。瞬时表达验证发现pre-miR04与FBA共表达注射烟草的荧光信号强度低于其他对照组,表明ptr-miR04与FBA之间存在互作关系。4.低温处理前,转基因材料中可溶性糖含量均明显高于野生型,而低温处理后反而显著低于野生型。猜测ptr-miR04对植株糖代谢途径有影响。综上,ptr-miR04是参与响应低温的负调控因子,其靶基因FBA则是正调控因子,在植株中超表达ptr-miR04前体基因,FBA表达受到抑制,植株抗寒能力下降。