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蓝舌病（bluetongue,BT）是一种由蓝舌病病毒（bluetongue virus,BTV）引起的通过库蠓等昆虫传播的非接触性病毒性动物传染病。主要感染反刍动物,为畜牧业带来巨大的经济损失,是国内外动物疫病防疫监测的重点。全世界共分离到至少24个血清型BTV,且各型间无交叉反应,因此快速的血清型检测方法的建立是预防本病的关键,以便针对当地流行的血清型选择相应疫苗控制本病。根据GenBank中已发表BTV17的L2基因序列（M17438.1）设计1对引物,从感染BTV17的BHK-21细胞中提取病毒RNA,RT-PCR扩增L2基因。利用Bac-to-Bac昆虫杆状病毒表达系统表达VP2蛋白。将L2基因克隆至pFastBacHTA供体质粒,构建重组供体质粒pFast-VP2。重组供体质粒转化DH10Bac感受态细胞,获得重组杆粒BAC-VP2。将重组杆粒转染Sf9昆虫细胞,得到携带L2基因的重组杆状病毒BACV-VP2。对转染细胞进行SDS-PAGE和Western Blot分析,结果显示VP2蛋白在Sf9昆虫细胞中得到成功表达,且重组蛋白主要以包涵体形式存在。重组VP2蛋白能够与抗BTV17绵羊阳性血清发生反应,显示出良好的抗原性。根据GenBank中已发表的BTV17的L2基因序列（M17438.1）设计两对引物,利用原核表达系统对L2基因进行分段表达。利用两对引物以重组供体质粒pFast-VP2为模板扩增出两段目的基因A和B。将A和B基因分别克隆到原核表达载体pET-30a中,构建重组表达载体pET-A和pET-B。将pET-A和pET-B分别转化大肠杆菌BL21,用IPTG诱导大肠杆菌BL21表达重组蛋白VP2-A和VP2-B。SDS-PAGE结果显示重组蛋白VP2-A和VP2-B均能在大肠杆菌中得到大量表达,主要以包涵体形式存在。表达产物以8M尿素变性后利用Ni2+NTA树脂对其进行变性纯化。Western blot结果表明两段重组蛋白均能与抗BTV17绵羊阳性血清发生特异性反应,具备良好的抗原性。以原核表达的重组蛋白VP2-A和VP2-B为免疫原共同免疫BALB/c小鼠,并通过常规杂交瘤技术将免疫后小鼠脾细胞与SP2/0细胞进行融合。以原核表达的两段重组蛋白为主要检测抗原,建立间接ELISA检测方法筛选分泌抗VP2蛋白单克隆抗体（MAb）的杂交瘤细胞。将第一次筛选到的阳性克隆以真核表达的重组VP2蛋白为检测抗原,通过间接ELISA方法进一步筛选,最终获得2株能稳定分泌抗BTV17 VP2蛋白MAb的杂交瘤细胞株,分别命名为BTV17 VP2-3F4、BTV17 VP2-4H10（以下简称为3F4和4H10）。Western blot结果表明2株MAbs均与重组蛋白VP2-A和VP2-B发生特异性反应,而与空载体表达产物对照不发生反应,具备良好的反应原性。间接免疫荧光结果表明,2株MAbs均与BTV17呈阳性反应,其中MAb 3F4与BTV1～9、BTV11～23、茨城病病毒、中山病病毒、赤羽病病毒、牛轮状病毒、牛呼肠孤病毒均呈阴性反应,与BTV10和BTV24呈弱阳性反应。利用合成肽方法对2株MAbs所识别的BTV17 VP2蛋白的抗原表位进行了鉴定,结果表明,MAb 3F4识别的抗原表位为540DPWNNR545,MAb 4H10识别的抗原表位为540DPWNNRA546。本研究制备的2株BTV17 VP2蛋白MAbs及所鉴定的抗原表位,为BTV17型特异性检测方法的建立及BTV17 VP2蛋白功能研究提供了基础,对BT的防控具有重要意义。