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犬瘟热病毒(Canine distemper virus, CDV)和犬细小病毒(Canine parvovirus virus,CPV)均能引起的犬的高度接触性、致死性传染病,是世界各地常见的犬只病毒性疾病常引起巨大损失。犬瘟热常表现为呼吸系统、消化系统和神经系统症状。犬细小病毒病常表现为出血性肠炎,在幼犬易引发心肌炎。临床上常用特异性的高免血清和单克隆抗体对犬瘟热和犬细小病毒病进行防治。利用特定抗原多次免疫后的蛋鸡可产生相应的特异性高免卵黄抗体(Egg yolk immunoglobulin, IgY),其较高免血清和单克隆抗体有成本低、技术简便、可大量生产等特点。试验1将市售的英特威CDV.CPV二联弱毒苗分别接毒于非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)、猫肾细胞(F81细胞)。Vero田胞采用同步和异步接种CDV的方法进行比较,选择不同血清浓度的F81细胞生长液同步接种CPV,试验结果为Vero细胞采用异步接种可获得较多的CDV,F81细胞同步接种CPV时最适宜的血清浓度为5%。并通过中和试验、反转录聚合酶链式反应(Reverse transcription-PCR, RT-PCR)、聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction, PCR)鉴定所增殖的病毒。试验2制备CDV和CPV蜂胶佐剂灭活苗分别对25周龄以上蛋鸡进行免疫,该试验持续21天,第1、7、14天蛋鸡产蛋后对其进行免疫,第4、7、10、14、17、21天收集鸡蛋,采用聚乙二醇6000(Polyethylene glycol6000, PEG6000)二步沉淀法提取鸡蛋中的CDV和CPV高免卵黄抗体。以浓缩后的病毒作为抗原,以未免疫的鸡蛋的卵黄抗体为对照,进行间接酶联免疫吸附(Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)试验,测定所得CDV. CPV高免卵黄抗体效价水平均为1:320。用固定病毒的中和试验方法分别检测市售CDV和CPV单克隆抗体效价分别约为1:64和1:128,而CDV和CPV高免卵黄抗体效价均约为1:32。试验3犬的胃酸pH值为1-2,而卵黄抗体在胃蛋白酶存在的条件下,pH值在2.0以下温育1h后完全失去活性。本试验将实验室制备的CDV和CPV高免卵黄抗体,分别加入酸化0.25%壳聚糖溶液中。其中高免卵黄抗体与壳聚糖的质量比为1:10,在超声作用下以硫酸钠为交联剂,利用形成的壳聚糖微球对高免卵黄抗体进行包封；其后分别以包封后的载药壳聚糖微球的上清液和未包封的高免卵黄抗体液作为包被抗原,二者的ELISA试验结果差异显著,壳上清液几乎不显色,壳聚糖微球对高免卵黄抗体具有良好的包封效果,未被微球包封的卵黄抗体极少。该载药微球在pH值为1的模拟胃液(Simulated gastric fluid, SGF)内37℃摇床2h,期间模拟胃液的蛋白质浓度持续下降,2h后该微球在显微镜下观察仍保持其良好的包封形态,所制备的载药壳聚糖微球能够很好的保护卵黄抗体,未有大量微球破损并释放出高免卵黄抗体,使口服高免卵黄抗体这一给药途径成为可能。目前国内外未见有关于CDV和CPV高免卵黄抗体壳聚糖微球的研究报道。