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绿藻是光合自养的真核微生物,它具有繁殖速率快,生长周期短,能量转化率高的特性,富含多种高附加值的产物,具有很高的应用价值。无菌种是菌株构建及优化和生物工程研究的基础。本论文系统地研究了绿藻的无菌种制备的方法和过程以及对所获得的无菌株绿藻的适宜的培养条件和生理特性做了初步的研究。1.确定了无菌株绿藻制备的工艺流程。根据藻体在液体培养基的生长情况及固体平板上菌落的特征采用:首先使用抗真菌药物（浓度为1.5 mg/mL克霉唑）去除真菌的污染;然后采用直接过滤、稀释划线等纯物理方法去除悬浮的大量细菌;由于细菌容易粘附在绿藻的黏质鞘上不易清除,进而使用表面活性剂（吐温80）和超声波破碎的辅助来分散杂菌和藻体的附着;最后使用消毒剂（次氯酸钠）1 mL的0.10%的次氯酸钠溶液加入到5 mL的悬藻液中经过处理5 min划平板,获得了绿藻的无菌种。2.确定了无菌株绿藻的适宜培养条件。通过对无菌株绿藻的最适宜培养基、外加C源、pH、N源、P源的筛选,得出如下结论:绿藻最适宜的培养基是BBM培养基,有机物质的加入会影响藻类的生长,使绿藻聚集成团,不利于其生长;碳酸盐和碳酸氢盐可以促进绿藻的生长,且碳酸氢盐的浓度为2 g/L;绿藻生长的最适宜pH为8;绿藻优先选用的N源为硝酸盐,浓度为300 mg/L,铵盐会抑制绿藻的生长;P源影响效果不明显,没有出现规律性。3.无菌株绿藻生理特性的研究。在获得了无菌种和确定了适宜培养条件下的基础上,通过定期的对绿藻的生长参数如:吸光度、干重、pH等的测定来研究绿藻的生长动力学。结论如下:藻液的吸光度、干重、pH随时间的变化趋势相同,含氮量相反,rmax=0.03024 g/L·d,μmax=0.01416 d-1,Ks=110.55 mg/L,td=2.04 h;吸光度和干重的线性方程:Y=0.00413X-4.219×10-4;通过对无菌种制备前后参数的测定可以得知由于杂菌的影响,使吸光度变化没有规律性,培养基pH变小。