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临床上绝经妇女广泛采用激素治疗(Hormone Therapy,HT)改善生活质量。大量资料表明:HT可以缓解绝经女性体内雌激素水平低下导致的围绝经期综合征,预防骨质疏松及老年性痴呆的发病,但长期应用HT增加深静脉血栓形成及乳腺癌的发病风险,仅用雌激素治疗而不加用孕激素者子宫内膜癌发病率明显升高。虽然HT对于缓解围绝经期症状,改善泌尿生殖道萎缩以及长期应用预防骨质疏松疗效肯定,但美国国立卫生研究院(National Institutes of Health,NIH)对其进行了5年的关于HT的临床研究的结论还是激起关于HT的广泛关注和讨论。当前,人们试图寻找一种新型的具有雌激素活性而不增加子宫内膜癌及乳腺癌的发病率的雌激素受体调节剂(Selective Oestrogen Receptor Modulators,SERMs)供临床选择用药。大量的流行病学调查结果发现,亚洲妇女绝经后直肠癌及乳腺癌的发病率低于西方妇女,同时骨折及潮热等发生率也少于西方妇女。研究发现:亚洲妇女膳食结构中富含异黄酮是导致该差别的主要原因。异黄酮多来自于大豆,可分为金雀异黄素(Genistein,GEN)、大豆黄素及大豆甙元三类。虽然三者结构存在细微差异,但均可与雌激素受体(Estrogen Receptor,ER)结合,然后与雌激素受体作用元件结合(Estrogen Receptor Element,ERE)发挥不同强度的雌激素活性。异黄酮的生物学活性包括:可能缓解潮热盗汗等围绝经期症状,可能拮抗骨质疏松及老年性痴呆发生,可能拮抗乳腺癌及子宫内膜癌等恶性肿瘤的发生。但目前尚缺乏大样本多中心的回顾分析而无法定论。异黄酮表现出的生物学效应提示其可能成为理想的SERMs。研究发现:配体与受体结合能力的强弱决定其生物学活性的强弱。异黄酮与ER的结合能力弱于雌二醇(Estradiol,E2),因而其结合ER后表现出的雌激素活性仅为E2的1/1000。要发挥与E2同等的生物学效应,仅靠摄入天然的剂量远不能达到要求。1988年日本武田公司对异黄酮进行结构改造后制成治疗骨质疏松(Osteoporosis,OP)的新药,疗效明显。提示异黄酮结构改造可以改变其原有生物学效应。基于以上思路,四川大学华西医学中心药学部以GEN母环为基本分子结构,在其不同部位加入不同活性基团,合成24个异黄酮改构化合物。前期实验结果显示,异黄酮改构化合物对不同的癌细胞增殖的生物学效应明显不同。按其抑制癌细胞增殖活性的强弱,选取抗癌活性最强的四种化合物(F8,F11,ZF3和ZF7)。经过前期预实验,发现四种化合物均具有一定强度的雌激素活性。本试验在此基础上,采用离体子宫内膜(癌)细胞平台对四种化合物的抑制细胞增殖活性进行筛选,并将其中抑制(癌)细胞增殖活性最强的化合物应用到在体动物模型,观察其对在体子宫内膜的生物学效应,为开发新型SERMs提供理论依据。本试验首先改良人子宫内膜细胞的原代培养方法,建立稳定的原代人子宫内膜细胞培养体系;利用该细胞培养体系和人子宫内膜癌细胞株(Human Endometrial Cancer-1-B ,HEC-1-B),采用MTT法对前期得到四种化合物的拮抗细胞增殖生物学活性进一步检验,得到抑制离体子宫内膜(癌)细胞增殖效果最好的化合物;构建去双卵巢大鼠模型,将该化合物用于去双卵巢大鼠模型,通过免疫组化和Western-blot等方法观察其对在体子宫内膜组织的生物学效应。我们的主要结果与结论如下:1.采用胶原酶消化+二次筛网过滤法进行原代子宫内膜细胞分离培养;利用上皮细胞和间质细胞的贴壁时间差别进行纯化。通过免疫组化鉴定,证明培养上皮细胞和间质细胞成功,其纯度可达到90%和95%以上并可稳定传代。该原代细胞培养体系满足后续实验的要求。2.利用构建的人原代子宫内膜细胞培养体系及HEC-1-B作为细胞筛选平台,采用MTT法观察异黄酮改构化合物F8, F11, ZF3, ZF7对离体子宫内膜细胞和子宫内膜癌细胞增殖的生物学效应。结果发现:除25μM F8作用24h后促进子宫内膜上皮细胞增殖外,其余时段四种化合物各剂量组均抑制两种细胞增殖,其活性具有时效性和量效性。实验结果显示F11抑制离体细胞增殖活性最强。3.给予去双卵巢大鼠模型F11腹腔注射10周后发现:F11增加大鼠子宫湿重/体重;促进大鼠阴道上皮成熟;促进大鼠子宫内膜腺体数目增加,腺腔增大;诱导大鼠子宫内膜ERβ表达上调而不显著增加子宫内膜PCNA的表达,其生物学效应呈剂量依赖性。F11可能结合ERβ发挥雌激素效应,其上调表达ERβ可能增强其雌激素活性,同时F11促子宫内膜细胞增殖作用微弱,其可能成为新型雌激素受体调节剂。