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研究目的:探讨乳糜化脂肪(Chyle Fat)对人增生性瘢痕(human Hypertrophic Scar,hHS)组织裸鼠模型的治疗效果;分析乳糜化脂肪来源干细胞(Chyle Fat Derived Stromal/Stem Cells,CFSCs)的形态学特征及生物学特性;观察乳糜化脂肪来源干细胞条件培养基(CFSCs-Conditioned Medium,CFSCs-CM)对增生性瘢痕成纤维细胞(Hypertrophic Scar Fibroblasts,HSFbs)的增殖、凋亡及侵袭能力的影响,以期为乳糜化脂肪治疗增生性瘢痕的相关作用机制研究提供理论依据。研究方法:1.乳糜化脂肪制备:将抽吸脂肪经孔径0.8mm纳米转换头(BD Luer-Lok connector)快速来回推注30次,后经0.5mm孔径滤网过滤收纳;2.人增生性瘢痕裸鼠移植模型制备;hHS共移植于18只无胸腺裸鼠背部皮下,4块瘢痕组织块/只,随机分为三组:阴性对照组、曲安奈德组及乳糜化脂肪组。不同组注射后瘢痕重量、组织病理学、免疫组织化学染色观察瘢痕转归;3.乳糜化脂肪来源间充质干细胞生物学特性初步研究;4.分离培养CFSCs,取P3代不加胎牛血清的DMEM/F12培养48h,获得CFSCs-CM,不加胎牛血清的DMEM/F12培养基作为对照组;5.获取人增生性瘢痕标本,以组织块贴壁法分离培养HSFbs;分别以CFSCs-CM、CG-CM处理HSFbs,CCK-8法检测细胞增值、细胞划痕检测迁移、Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡;6.CFSCs-CM、CG-CM条件培养基处理HSFbs48h,酶联免疫吸附试验检测实验组、对照组上清液中ColⅠ(Ⅰ型胶原蛋白)、Col Ⅲ(Ⅲ型胶原蛋白)、Decorin(核心蛋白聚糖,DN)及α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)水平;蛋白免疫印记实验检测两组中HSFbs的Col Ⅰ、Col Ⅲ蛋白表达情况。研究结果:1.乳糜化脂肪:在不断的机械性乳化过程中,抽吸颗粒脂肪最终变成液体并呈现白色乳糜状外观,过滤流出的液体收纳在无菌收纳器中,即为乳糜化脂肪;2.瘢痕内注射乳糜化脂肪能够改善胶原堆积等组织学特征;3.实验在制备乳糜化脂肪时,脂肪细胞在机械乳化过程中被破坏,镜下未见明显脂肪细胞,在后期的细胞培养与传代纯化过程中,却能够获得具备良好分化潜能的 ADSCs(Adipose Derived Stromal/Stem Cells,ADSCs),证明乳糜化脂肪内虽未见脂肪细胞,但有大量ADSCs存在,我们称之为CFSCs;4.人CFSCs能够高表达间充质干细胞表面标记物,增殖能力强,且诱导后能够向脂肪组织、骨组织及软骨组织分化;5.CFSCs-CM可以抑制HSFbs的正常生长增殖;CFSCs-CM可以抑制HSFbs迁移;CFSCs-CM体外环境下处理HSFbs诱导细胞凋亡;6.CFSCs-CM抑制HSFbs中纤维化蛋白因子Col Ⅰ,Col Ⅲ和α-SMA蛋白的表达;CFSCs-CM对HSFbs发挥抗纤维化作用,抑制HSFbs分泌表达Col Ⅰ等细胞外基质蛋白。研究结论:1.成功构建了人增生性瘢痕移植裸鼠模型,且瘢痕内注射乳糜化脂肪能够改善胶原堆积等组织学特征;2.乳糜化脂肪富含CFSCs,增殖能力佳,干性极强,呈三系分化;3.CFSCs-CM能够抑制HSFbs的细胞分裂增殖及迁移能力,影响细胞凋亡;4.CFSCs-CM抑制HSFbs细胞外基质成分合成;CFSCsCM可能通过旁分泌途径来发挥抑制HSFbs的作用。