血红密孔菌H1对蒽和芘降解机制的研究

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多环芳烃是由两个或两个以上苯环稠合而成的有机化合物,是一种环境中广泛存在的持久性有机污染物。目前研究最为广泛的多环芳烃降解微生物主要是白腐真菌。本研究以前期分离到的44#白腐真菌为供试菌株,经IST测序鉴定并命名为血红密孔菌H1,并分析了该菌的木质素降解酶的产酶特性,以蒽和芘为模式多环芳烃,研究血红密孔菌H1对蒽和芘的降解率、代谢方式和代谢途径,旨在深入认识白腐真菌对多环芳烃的代谢机制,为多环芳烃污染的白腐真菌修复奠定理论基础。主要研究结果如下:1.通过ITS法扩增得到ITS片段,测序后经NCBI序列比对,鉴定并命名为血红密孔菌H1。通过实验发现该真菌分泌的木质素降解酶系中只能检测到漆酶活性而不能检测到木质素过氧化物酶和锰过氧化物酶的活性。在第十二天时漆酶活性最高为5.36 U/mL,添加2g/L的麸皮后漆酶活性达到15.60 U/mL,该漆酶最适pH约4.5。经SDS-PAGE测定漆酶单体分子量为43.2 KDa。2.在培养基中添加50 ppm的蒽和芘为唯一碳源,经过两周的摇瓶培养发现血红密孔菌H1能以蒽为唯一碳源进行生长而不能利用芘。添加葡萄糖和麸皮进行共代谢后蒽和芘的降解率显著升高,蒽降解率为71.3%,芘降解率为30.2%。通过GC-MS检测发现蒽的主要降解产物是9,10-蒽醌,芘的降解产物可能是4,5-二氢芘和4,5-二甲基菲。3.通过摇瓶培养血红密孔菌H1,离心获得含有漆酶的胞外酶液和含有细胞色素P450的胞内组分,加入含有蒽和芘的反应体系,通过HPLC测定蒽和芘的降解研究各组分的作用。发现蒽的降解是由胞外的漆酶起主要作用,芘的降解主要是通过胞内的细胞色素P450。通过添加漆酶和细胞色素P450抑制剂的实验进一步证明了前面的结论。总的来说,血红密孔菌H1对蒽和芘的降解不是由某一类单独的酶或反应一步完成的,而是通过胞外酶和胞内组分协调完成的。
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