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H9N2亚型禽流感是一种对家禽危害严重的传染病,和人类公共卫生也密切相关。流行病学研究表明,近年来国内家禽中有多种不同基因型的H9N2亚型AIV流行,为了揭示H9N2亚型AIV在广东地区的流行规律及其对水禽和哺乳动物致病性特点,本研究对20162017年从广东省内家禽分离到的7株H9N2亚型AIV的全基因组遗传演化规律、抗原性变异及其对雏鹅和Balb/c小鼠的致病性进行了研究,结果如下。遗传演化分析显示:7个分离株的HA基因均分布在BJ/94-like分支上,即h9.4.2.2分支,与疫苗株A/Chicken/Shanghai/F/98毒株同属一个分支;7个分离株的NA基因均位于BJ/94-like分支,其中5株与A/Chicken/Wuhan/JXQL01/2015亲缘关系最近;7个分离株PB1、PA、NP和NS基因均位于F/98-like分支上,而PB2基因位于以毒株A/Chicken/Shandong/SIC39/2015为代表的新分支上;有6个分离株M基因位于以毒株A/Quail/HongKong/G1/97为代表的G1-like分支上,其中1株CK/GD/17126/2017位于北美谱系的TW/66-like分支上,表明H9N2亚型AIV的基因呈现多样化重排或重组。病毒基因及其相应氨基酸序列析发现:7个分离株HA基因的氨基酸序列333338位裂解位点的氨基酸序列只有PSRSSR一种模式。缺乏碱性氨基酸插入,符合低致病性禽流感的序列特征;在234位氨基酸均为L,具备与哺乳动物唾液酸a-2,6-半乳糖苷受体结合的特征,对哺乳动物具有感染性;在315位氨基酸由P突变为S,导致在313位增加了一个糖基化位点。7个分离株在6365位NA蛋白颈部缺失了T、E和I 3个氨基酸。除了毒株CK/GD/17126/2017外,其余毒株在31位均发生了S→N的突变。4株H9N2亚型AIV分别以106 EID50/200μl的剂量肌肉注射7天龄鹅后,所有攻毒鹅均无明显发病症状,从鹅的喉头、泄殖腔拭子均未能检测到病毒;攻毒后第4d,CK/GD/17549/2017感染组可以在脑和心脏检测到了病毒,其余3株病毒感染鹅的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏和脑组织均未能检测到病毒。组织病理学检查显示,病毒感染后除个别鹅的脑组织发生神经细胞水肿、细胞核深染外,其余组织均未发生明显的病变。4株H9N2亚型AIV分别以106 EID50/只经滴鼻接种4周龄Balb/c小鼠,攻毒后各组攻毒小鼠血清HI抗体呈阳性,均出现了体重下降,但无小鼠死亡;各攻毒组均可在小鼠肺脏内检测到病毒;其中毒株CK/GD/16719/2016感染组还可在鼻甲骨、脑和肾脏检测到病毒,毒株CK/GD/17530/2017感染组可在心脏中检测到病毒。组织病理学检查显示病毒感染后可以导致心脏、肺脏和脑组织产生较明显的组织病理学变化。表明一些H9N2亚型AIV分离株感染后可在Balb/c小鼠体内多个组织脏器中复制,具有一定的致病性。