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DNA疫苗能刺激机体产生细胞免疫与体液免疫,其制造成本低廉,易于储存及运输。但是,裸DNA疫苗在体内传输过程中,很容易被酶水解,不能引起足够的免疫原性,很难达到好的免疫保护效果。DNA递送载体能够保护DNA分子不被酶水解。本课题选取聚酰胺-胺(PAMAM)树状化合物作为基因疫苗递送载体,通过细胞毒性实验及细胞凋亡实验研究了PAMAM G4及PAMAM G5在多种细胞系中的毒性,在此基础上初步探索了该树状化合物作为人呼吸道合胞病毒(Human respiratory syncytial virus, RSV)基因疫苗载体的在动物模型上应用。选取多个不同的电荷(N/P)比,制备PAMAM/DNA复合物,琼脂糖凝胶电泳结果表明,PAMAM G4及PAMAM G5都能够与DNA形成复合物。酶切保护实验结果表明,形成复合物后,DNA不被核酸酶降解,即PAMAM能够有效保护所携带的DNA分子不被降解。为进一步探索PAMAM的细胞毒性,分别选取了HEK293细胞、HepG2细胞、U251细胞及A549细胞进行毒性实验。结果表明,对于同种细胞系PAMAM G5的细胞毒性高于PAMAM G4的细胞毒性。PAMAMG4 48 h的半抑制率在0.1μg/μL,而PAMAM G5 48 h的半抑制率在0.05μg/μL。对于同一种PAMAM载体,随着浓度的增加毒性增大,细胞毒性呈现剂量依赖性。细胞凋亡实验结果表明,PAMAM在加入24 h后能够导致一些细胞坏死或晚期凋亡,早期凋亡现象不明显,同时,细胞坏死或晚期凋亡程度也呈现剂量依赖性,与MTT检测结果一致。在以上实验的基础上,选取N/P比为10：1作为免疫小鼠实验制备PAMAM/DNA复合物的标准。小鼠免疫实验初步结果表明经腿部肌肉注射PAMAM/DNA复合物,小鼠产生相应抗体。