论文部分内容阅读
目的:首先通过对我省专业运动员大规模普查,建立我省专业运动员常规免疫指标参考范围,为合理评估运动员训练效果和恢复状态提供依据;然后调查四周高强度训练对专业运动员免疫功能的影响,探讨高强度训练对运动员免疫的抑制作用;继而研究葫芦素E(Cuc E)的免疫调节作用及其机制,探讨Cuc E作为运动员免疫调节药物的潜在可能性。方法:(1)采集广东省棒球队、垒球队、篮球队、曲棍球队、手球队和足球队专业运动队员共603例样品,检测白细胞分类和血清免疫球蛋白水平,用SPSS软件计算95%参考区间建立运动员常规免疫指标参考范围(2)以广东省11名优秀专业皮划艇运动员为模型进行调查,在四周高强度训练开始前和训练结束24 h后各进行一次肘静脉采血,使用全自动血球分析仪检测白细胞分类,使用全自动生化分析仪检测血清免疫球蛋白,使用ELISA试剂盒检测血清IL-6、IL-8、TNF-α和IL-10,使用流式细胞术检测淋巴细胞亚群及调节性T细胞,使用SPSS软件对数据进行统计,探讨四周高强度训练对专业运动员免疫功能的影响。(3)用佛波醇酯(PDB)+离子霉素(Ion)激活人PBMC和Jurkat T细胞,利用免疫荧光染色结合流式细胞术分析人PBMC中CD3+T细胞活化抗原CD69和CD25的表达,用流式微球阵列检测Cuc E对活化的PBMC和Jurkat T细胞白介素2(IL-2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和干扰素γ(IFN-γ)表达的影响情况,用定量PCR(q PCR)法检测Cuc E对IL-2、TNF-α和IFN-γm RNA表达的影响情况,用免疫印迹法检测NF-κB信号通路和MAPKs信号通路的相关蛋白的表达,用免疫荧光分析法观察NF-κB/p65的核转位情况,探讨葫芦素E对适应性免疫功能的调节作用,评价其作为调节运动员调节药物的潜在可能性。结果:(1)广东省专业运动员白细胞计数参考范围为(3.7~8.8)×109个/升,嗜中性粒细胞计数参考范围为(1.6~5.2)×109个/升,淋巴细胞计数参考范围为(1.4~3.4)×109个/升,单核细胞计数参考范围为(0.16~0.58)×109个/升,嗜酸性粒细胞计数参考范围为(0~0.5)×109个/升,嗜碱性粒细胞计数参考范围为(0~0.1)×109个/升,嗜中性粒细胞百分比参考范围为(37~66)%,淋巴细胞百分比参考范围为(25~52)%,单核细胞百分比参考范围为(2.5~8.4)%,嗜酸性粒细胞百分比参考范围为(1~7)%,嗜碱性粒细胞计数百分比参考范围为(0~1.5)%,免疫球蛋白G参考范围为(7.58~16.91)g/L,免疫球蛋白A参考范围为(0.80~3.49)g/L,免疫球蛋白M参考范围为(0.53~3.41)g/L。(2)四周高强度训练后,白细胞计数极显著降低(P<0.01),嗜中性粒细胞计数、淋巴细胞计数、单核细胞计数、嗜中性粒细胞百分比、淋巴细胞百分比和单核细胞百分比无显著差异(P>0.05);血清免疫球蛋白G极显著降低(P<0.01),免疫球蛋白A和免疫球蛋白M无显著差异(P>0.05);血清IL-6水平显著升高(P<0.05),IL-8和TNF-α极显著升高(P<0.01),IL-10水平极显著降低(P<0.01);B细胞百分比、B细胞计数、CD3+CD4+细胞百分比、CD3+CD4+细胞计数显著下降(P<0.05),CD3+CD4+/CD3+CD8+比值极显著下降(P<0.01),NK细胞百分比、NK细胞计数、T细胞百分比、T细胞计数、CD3+CD8+细胞百分比、CD3+CD8+细胞计数无显著变化(P>0.05);CD4+CD25+Fox P3+Treg/CD4+比值和CD4+CD25+Fox P3+Treg细胞计数也无显著变化(P>0.05)。(3)Cuc E能明显抑制PDB+Ion激活的PBMC中CD3+T细胞早期活化标志分子CD69和中期活化分子CD25的表达,可以剂量依赖方式抑制活化的PBMC和Jurkat T细胞的IL-2、TNF-α和IFN-γ的表达,并且在m RNA水平上均可抑制活化Jurkat T细胞IL-2、TNF-α和IFN-γ转录,对信号通路研究发现Cuc E显著抑制活化Jurkat T细胞胞浆IκB和NF-κB/p65磷酸化水平,并抑制NF-κB/p65核转位,而对p38MAPK、JNK和Erk1/2的磷酸化水平无显著下调作用。结论:专业运动员多项免疫指标处于普通人群参考范围较低水平,高强度训练可导致专业运动员发生免疫抑制,同时伴随多种炎性细胞因子上升,而葫芦素E可通过下调NF-κB信号通路从m RNA水平和蛋白质水平上显著抑制细胞因子的表达,对适应性免疫具有较明显调节作用,有望成为缓解运动员运动性细胞因子上升的潜在药物。