【摘 要】
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蛋白酶抑制剂是一类能选择性地降低靶蛋白酶活性的小分子量蛋白质。植物蛋白酶抑制剂参与了植物内源性蛋白酶活力的调节、植物贮藏蛋白的运输、保护植物免受真菌和昆虫的侵蚀
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蛋白酶抑制剂是一类能选择性地降低靶蛋白酶活性的小分子量蛋白质。植物蛋白酶抑制剂参与了植物内源性蛋白酶活力的调节、植物贮藏蛋白的运输、保护植物免受真菌和昆虫的侵蚀,作为抗虫因子,已广泛地应用于抗虫转基因植物的选育。而且蛋白酶抑制剂作为新型药物在癌症、艾滋病等疾病的治疗方面具有应用价值。 我们从菠菜种子中分离纯化得到胰蛋白酶抑制剂SOTI(Spinacia oleracea L seeds Trypsin inhibitor),对其进行了部分性质研究。 藜科菠菜属植物菠菜(Spinacia oleracea L)种子研磨粉碎后,经过乙醚脱脂、pH4.5的硫酸抽提、65℃热变性除杂蛋白、35—75%饱和度硫酸铵分部盐析等步骤,得到抑制剂粗提物。 进一步利用DEAE-52纤维素离子交换柱层析,胰蛋白酶—Sepharose 4B以及G75葡聚糖凝胶过滤,最后从粗提液中分离纯化得到其中的胰蛋白酶抑制剂(SOTI)。SDS-PAGE分析其近似分子量为22kD。等电聚焦实验显示其等电点为4.02。热稳定性实验显示SOTI在100℃水浴条件下可以保持部分的抑制活性,具有极高的热稳定性。 利用蛋白质内源荧光检测SOTI在不同溶液中的构象变化。当激发光波长为
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