论文部分内容阅读
[目的]缺血性卒中是神经内科最常见的疾病之一,具有高致残率及高致死率,目前尚缺乏安全有效的治疗方法。大量文献报道,组蛋白去乙酰化酶抑制剂(Histone deacetylase inhibitor, HDACI)在缺血性脑卒中的动物和细胞模型中发挥了重要的神经保护作用。但是,何种亚型的HDACI起到有益作用目前尚无定论。本次研究旨在研究各亚型HDAC在缺血性卒中后大脑皮层的表达情况,进而探讨其特异性HDACI的神经保护作用,为治疗缺血性脑卒中的临床研究提供新的思路。[方法]本研究分为体内实验和体外实验。体内实验部分构建小鼠大脑中动脉闭塞模型(middle cerebral artery occlusion, MCAO),于3h、12h、24h和48h时间点分别取其梗死侧的大脑皮层组织,应用RT-PCR检测HDAC各亚型mRNA表达水平,选取具有变化趋势和有意义的亚型进一步应用western blotting检测其蛋白表达水平。体外实验部分应用原代大脑皮层神经元构建糖氧剥夺模型(Oxygen and glucose deprivation, OGD), RT-PCR检测OGD再灌注后15min、3h 和 24h时间点HDAC3、HDAC6 mRNA表达水平；western blotting检测其相应的蛋白水平。分别应用RNA干扰技术抑制HDAC3及HDAC6表达后,利用MTT和PI染色分别检测特异性抑制HDAC3及HDAC6对OGD后神经元存活率和晚期凋亡率的影响。[结果]HDAC各亚型(HDAC 1-11)均在正常及MCAO后小鼠大脑皮层中表达,但表达水平各不相同。其中,在mRNA水平,HDAC1、2、5在缺血再灌注后表达降低,而HDAC3、6、11表达增加；在蛋白水平,HDAC1、2、5、6、11与mRNA水平一致。免疫荧光结果表明,HDAC3和6主要表达于大脑皮层神经元。体外研究结果进一步证实,OGD处理后HDAC3 mRNA表达水平于3h后增加,并于24h达到高峰。而HDAC6 mRNA表达水平在3h时达到顶峰,24h时又逐渐下降。利用shRNA技术分别干扰HDAC3和HDAC6在神经元中的表达,均增加了OGD处理后的神经元的存活率[结论]HDAC各亚型在缺血性卒中的表达水平及变化趋势并不相同,提示其在缺血性卒中后发挥不同作用。选择性抑制其中某些亚型可能具有神经保护作用。HDAC3和HDAC6很可能在缺血性卒中病理过程中发挥重要作用,其选择性抑制剂可能具有重要的研究意义。