PCR方法检测端粒长度

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目的 端粒在细胞正常生理功能运转过程中起重要作用,同一组织端粒的长度变化与年龄呈负相关,即随着年龄的增加,端粒长度均表现为逐渐变短的趋势,这种变化趋势表现为组织特异性,即同年龄不同组织细胞端粒的长度不同(在生殖细胞中,由于端粒酶的作用,端粒长度保持不变),而且同一组织细胞端粒长度随年龄缩短不均衡,并且发现这种不均衡大体分为三个阶段,婴幼儿时期端粒缩短趋势最快,青少年时期减缓,至壮年以后速度有所回升。我们采取不同年龄阶段同一组织(外周血)样本排除组织差异后,利用实时定量PCR的方法通过T/S的比值检测相对端粒长度,如果检测的样本量足够大,就有可能建立起端粒长度与年龄的相关曲线以及方程。 方法 278例外周血样本用改进后的酚、氯仿、异戊醇法提取DNA,采用PCR方法,扩增不同年龄阶段样本的端粒片断,测序检测确定为目的片段,再用实时定量PCR检测端粒相对长度。 结果 普通PCR扩增出长度大约为200~600bp之间的多条端粒片断,测序结果显示为目的片段,实时定量PCR可以扩增端粒片断,利用实时定量PCR检测端粒相对长度的方法可行。 结论 PCR的方法可以扩增端粒片断,与经典的Southern杂交方法相比具有:简便、快捷、操作容易、实验室费用消耗较低等特点。并且通过本次试验对用实时定量PCR的方法检测端粒相对长度,做了部分尝试,认为该方法可行,为后续试验做好准备。
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