第一部分: 人胆囊癌细胞系GBC-SD p53基因突变的研究 目的 对体外培养的人胆囊癌GBC-SD细胞,应用免疫细胞化学SP法和PCR产物直接测序技术,分别从蛋白质和分子水平检测其p53基因状况,为深入研究GBC-SD细胞系生物学行为奠定基础。 方法 应用细胞培养技术,体外培养人胆囊癌GBC-SD细胞。通过免疫细胞化学SP法定性了解其P53蛋白的表达情况;以GBC-SD细胞基因组DNA为模板,PCR技术扩增p53基因4,5,6,7,8,9外显子,对所得产物经2%琼脂糖凝胶电泳鉴定后,进行正、反向直接测序分析。将测序结果通过NCBI网站应用Blast软件,与基因库中人类p53基因序列进行同源性对比分析。 结果 体外培养的GBC-SD细胞在含10%灭活新生牛血清的RPMI-1640培养液中生长状态良好。细胞经爬片生长并固定后,免疫细胞化学SP法染色显示P53蛋白过表达;PCR技术成功扩增p53基因4,5,6,7,8,9外显子,对PCR纯化产物进行正、反向测序检测,所得结果经Blast软件分析后证实,GBC-SD细胞p53基因第5外显子126位密码子存在TAC→AAC的碱基颠换,因而使其编码的氨基酸从酪氨酸→天冬酰胺,产生错义突变。 结论 人胆囊癌GBC-SD细胞系表达突变型P53蛋白,126位密码子的点突