副鸡禽杆菌荚膜多糖提取分析及免疫原性研究

来源 :河北工程大学 | 被引量 : 4次 | 上传用户:zbiao1222
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副鸡禽杆菌(Apg)可引起鸡传染性鼻炎,该病是以鸡头和眼睑肿胀为主要症状的急性呼吸道传染病,主要引起育成鸡生长发育受阻和淘汰率增加,且造成蛋鸡产蛋量明显下降,给我国养禽业造成了巨大损失。2012年12月,我国南方某些蛋鸡养殖场出现了大量疑似鸡传染性鼻炎的病例,本研究对送检病鸡样品进行了细菌学检测。通过细菌分离、PCR、平板凝集试验,鉴定出4株副鸡禽杆菌,人工感染试验鸡能复制出与临床表现一致的病例。采用血凝和血凝抑制试验对分离菌株进行血清学分型,最终确认引起该病的病原体是B型副鸡禽杆菌。为了探讨以荚膜多糖(CPS)为抗原成份研发该病新型疫苗的可行性,本研究用乙醇沉淀法在副鸡禽杆菌培养液上清中提取荚膜多糖,以苯酚-硫酸法测定其含量,并利用高效液相色谱(HPLC)分析多糖组分及分子量大小。结果显示,每升菌液可以抽提得到荚膜多糖85mg,含量为62%,该多糖主要由L-鼠李糖、D-木糖、D-葡萄糖等单糖组成,分子量约为209Ku。通过动物实验,分别研究了荚膜多糖和血凝素(HA)成份单独接种或混合免疫的免疫保护效果。用HA、C按PS和CPS+HA分别免疫SPF鸡后进行攻毒试验,在首免、二免后分别采血,利用ELISA方法检测血清抗体效价并计算各试验组鸡只的保护率。结果显示在免疫剂量和免疫途径相同时,CPS+HA联合免疫组抗体水平高于HA、CPS单独免疫组;与肌肉注射相比,眶下窦注射免疫可显著提高血清抗体水平和保护率。表明B型副鸡禽杆菌荚膜多糖具有一定的免疫原性,且与HA结合后免疫保护率也有显著提高。
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