本文拟在初步建立造血干细胞移植预处理诱发口腔黏膜炎(CTOM)模型的基础上进一步完善该模型，以期解决该模型现存的成模率低、动物死亡率高等问题；并探讨NF-κB、IL-1β、TNF-α水平在CTOM中的改变，为明确CTOM发病机制提供初步研究依据。 研究目的： 1.完善CTOM动物模型。 2.探讨NF-κB、IL-1β、TNF-α在CTOM中的表达及意义。 研究材料与方法： 1.优化BUCY预处理给药方案采用BUCY(马利兰Busulfan，环磷酰胺Cyclophosphamide)预处理方案，实验第1、2、3天灌胃给予马利兰，第1、2天腹腔注射环磷酰胺，第3和/或4天麻醉下搔刮左颊黏膜至轻度充血。将96只雄性SD大鼠分为16组，每组BUCY剂量不同，进行摸索，结果显示在氨基酸(剂量约3.0g/kg/d)提供营养支持的条件下，BUCY预处理方案在马利兰8.0mg/kg/d(总剂量为24.0mg/kg)、环磷酰胺120mg/kg/d(总剂量为240mg/kg)时为CTOM动物模型最优给药方案。(详细实验步骤见附件2)。 2.完善CTOM动物模型65只SD大鼠随机抽取41只作为模型组(模型1组15只，不处死、观察CTOM自然过程；模型2组26只，不同时点处死、动态观察CTOM)，24只为对照组(对照1组12只，进行搔刮；对照2组12只，不作任何处理)。实验第1、2、3天灌胃给予马利兰8.0mg/kg/d、第1、2天腹腔注射环磷酰胺120mg/kg/d，第3和/或4天麻醉下搔刮左颊黏膜至轻度充血。每天评估OM指数、记录大鼠体重等，分别于3、4、6、8、10、12、14天处死大鼠，收集血液、骨髓和口腔黏膜溃疡组织标本，检测血象、骨髓象，组织标本进行病理分析。 3.NF-κB、IL-1β、TNF-α的检测复制CTOM动物模型30只，根据实验1所收集的资料，选择有特征性变化趋势的第4、5、9、12、14天处死动物，收集黏膜标本，标本沿中线分为两部分。部分用于免疫组织化学，部分用于酶联免疫吸附实验。 3.1免疫组织化学分析标本中性福尔马林固定后，进行‘包埋、切片。免疫组化染色检测NF-κB、IL-1β、TNF-α的表达，光镜下观察NF-κB、IL-1β、TNF-α的动态分布特点。 3.2酶联免疫吸附实验分析液氮冻存的标本，冰浴下匀浆、提取总蛋白、测定蛋白含量。酶联免疫吸附实验检测各样品IL-1β、TNF-α浓度、计算细胞因子相对含量，进行各因子与OM指数的相关性分析。 研究结果： 1.CTOM动物模型的完善模型组41只大鼠CTOM总体发生率为80.49％(33/41)，其中3-4级OM为63.64％(21/33)。模型1组大鼠CTOM发生率为80％(12/15)，其中3-4级CTOM为58.34％(7/12)。口腔体征为早期出现点状红斑或局部白色水肿，随后表现为点状糜烂、溃疡形成，假膜覆盖；溃疡持续时间约8-9天。镜下表现为上皮脱落，溃疡形成，上皮下少量炎症细胞浸润。OM指数在第5天达到最高点(2.26±0.79)，到第14天为0。大鼠体重在用药后持续下降，第9天体重达最低点(98.50±20.27g)后开始缓慢上升。骨髓极度抑制出现第4-6天，同时白细胞计数值达最低(0.25±0.05109/L)，随后骨髓增生逐渐恢复至基本正常状态，白细胞计数值缓慢上升。 2.IHC结果第4天，口腔黏膜上皮和上皮下NF-κB、IL-1β和TNF-α表达均为阳性；溃疡形成后，NF-κB表达阴性，IL-1β和TNF-α表达呈阳性；第14天，即口腔黏膜完全修复后，NF-κB又出现阳性表达，IL-1β、TNF-α表达阴性。 3.ELISA细胞因子水平及其与OM指数的关系IL-1β水平在第4天最高，其余时点IL-1β水平较低。第4天IL-1β浓度为39.50±6.35pg/ml，IL-1β相对含量=0.3207±0.0423pg/mg。模型组与对照组及模型组不同时点的黏膜标本IL-1β水平差异有显著性(P＜0.01)。各时点和正常黏膜标本的TNF-α水平均较低，模型组与对照组及模型组不同时点的黏膜标本TNF-α水平差异有显著性(P＜0.01)。对IL-1β、TNF-α与OM指数进行相关性分析后，OM指数与IL-1β水平(r=0.4343，P=0.024)表达显著相关。 研究结论： CTOM动物模型在发病率、临床表现及实验室指标等各方面基本模拟了临床CTOM患者的变化。 口腔黏膜中IL-1β和TNF-α在CTOM发生发展过程中低水平表达，且IL-1β与OM指数相关有显著性，提示IL-1β可能与CTOM发生发展过程关系密切。