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支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb)是一种重要的病原菌,可广泛感染家畜、野生动物和实验动物呼吸道上皮,能引起猪、马、猫、狗、兔、小鼠、豚鼠等哺乳动物的呼吸道疾病,常导致感染动物发生鼻炎和支气管肺炎。人也有感染该菌的报道,尤其是小孩和免疫力缺陷的人群。该菌在兔群中感染率非常高,危害家兔健康,严重影响实验兔质量和科学研究。目前,国内外在猪萎缩性鼻炎的研究中,对波氏杆菌的研究较为深入,但对家兔波氏杆菌的研究较少,对其检测方法的报道更少,特别是到目前为止,国内外有关兔波氏杆菌单克隆抗体的研究仍未见报道。鉴于单抗在疾病的诊断、防治方面具有无可比拟的优越性,本文制备了该菌的单克隆抗体并建立了该菌的ELISA检测方法。主要试验和结果如下：1.以Bb分离株BLJ05的灭活菌液为免疫原,腹腔免疫BALB／c小鼠,采用常规杂交瘤技术制备Bb单克隆抗体(McAb),结果获得两株能稳定分泌抗Bb单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为A7D5和D6B2。用间接ELISA、Western-blot等方法对所制备的McAb特性进行鉴定。两株杂交瘤细胞株A7D5和D6B2小鼠腹水抗体效价分别为1：409600和1：102400；且不与兔大肠杆菌、多杀性巴氏杆菌、产气荚膜梭菌等兔的常见病原菌反应,特异性强。两株单抗亲和力实验表明杂交瘤细胞株A7D5亲和力略高于D6B2。ELISA相加试验表明它们针对相同的抗原表位。该杂交瘤细胞株的获得为今后兔支气管败血波氏杆菌的诊断、防治和流行病学调查等奠定了基础。2.以Bb分离株BLJ05为免疫原,制备兔抗Bb免疫血清,将其IgG提纯,并利用第一章制备的单克隆抗体建立Bb双夹心ELISA检测方法。以兔抗Bb IgG铺板,用方阵法筛选两种抗体最佳反应浓度；用特异性试验、敏感性试验和重复性试验对该方法进行鉴定,并与PCR检测方法比较。结果显示,免疫血清IgG的最佳稀释度为1：6400,浓度为2.5 mg/L；单抗IgG的最佳稀释度为1：800,浓度为5 mg／L。特异性试验和重复性试验表明,该方法特异性强、重复性好,与兔常见菌大肠埃希氏菌、多杀性巴氏杆菌和产气荚膜梭菌均不发生反应,同时与PCR检测方法的符合率为100%。