论文部分内容阅读
背景与目的卵巢癌（ovarian cancer）是妇科常见的三大肿瘤之一,由于卵巢癌患者初始症状不太明显及缺乏有效的早期诊断方法,绝大多数患者确诊时已属于晚期。尽管随着临床医师手术技能的提高、新设备、新药物应用于卵巢肿瘤的治疗中,但是晚期卵巢癌的5年生存率仍然为25%左右。因此,研究更好的卵巢肿瘤早期诊断及治疗方式是当务之急之事。miRNA在细胞增殖、凋亡、分化及发病机制中有重要的调控作用,miRNA在肿瘤的发生、发展过程扮演者“癌基因”和“抑癌基因”的双重生物学功能。miR-622能促进肝癌、胃癌、肺癌等肿瘤细胞的增殖,但是其对卵巢癌细胞生物学特性的影响及机制尚不清楚,本研究通过生信网站预测miR-622作用的靶基因,探讨miR-622对卵巢癌细胞生物学行为的影响。材料与方法采用qRT-PCR（反转录聚合酶链式反应）检测卵巢癌细胞系SKOV3、OVCAR4、OVCAR8、TOV21G及正常卵巢上皮细胞IOSE80中miR-622的表达情况并选择目标细胞系作为下一步实验;对选取的卵巢癌细胞系分别转染miR622-mi与mi-nc;miR622-in与in-nc并分组,并通过qRT-PCR来验证转染效果。通过Targetcar、miRDB及miRTarBase等生信在线网站预测miR-622可能作用的靶基因,并通过Western Blot来验证靶基因在各组中的表达。CCK8检测miR-622对卵巢癌细胞增殖的影响,细胞流式实验检测miR-622对卵巢癌细胞凋亡的影响,transwell及划痕实验检测miR-622对卵巢癌细胞侵袭及迁移的影响。结果1.miR-622在卵巢癌细胞系中表达量均上调,由高到低依次为OVCAR4>SKOV3>OVCAR8>TOV-21G,与正常卵巢细胞IOSE80相比miR-622在卵巢癌中表达差异具有统计学意义（P<0.05）。2.收集lipo3000转染的OVCAR8细胞上调组（miR622-mi）与对照组（mi-nc）,下调组（miR622-in）与对照组（in-nc）,分别对两组细胞进行转染后RT-PCR,结果提示:上调组（miR622-mi组）miR-622的表达量明显升高,下调组（miR622-in组）miR-622表达量明显降低,与各自的对照组相比,差异具有统计学意义（P<0.05）。3.通过生信分析MAPK1与miR-622存在结合区,Western Blot结果显示:上调组（miR622-mi）组MAPK1及ERK表达量高于对照组。4.CCK8实验结果显示:上调组（miR622-mi）与对照组（mi-nc）相比,其OD值在6h和24h时差异均无统计学意义;48h后差异均具有统计学意义（P<0.05）;下调组（miR622-in）与对照组（in-nc）相比相比,其OD值在6h差异均无统计学意义;24h后差异均具有统计学意义（P<0.05）。5.细胞流式实验检测细胞凋亡情况结果显示:上调组（miR622-mi）与对照组（mi-nc）相比,细胞凋亡率差异无统计学意义;下调组（miR622-in）与对照组（in-nc）相比,细胞凋亡率明显高于对照组。6.细胞划痕实验结果显示:上调组（miR622-mi）与对照组（mi-nc）相比在划痕后24h、48h相比,miR622-mi组细胞迁移能力明显高于对照组:下调组（miR622-in）与对照组（in-nc）相比,24h和48h细胞迁移能力无明显差异。7.Transwell实验结果显示:上调组（miR622-mi）与对照组（mi-nc）相比及下调组（miR622-in）与对照组（in-nc）相比,细胞侵袭能力无明显差异。结论1.miRNA-622在卵巢癌细胞系中表达上调。2.miRNA-622可能通过MAPK1/ERK信号通路促进卵巢癌细胞的增殖、迁移,抑制卵巢癌细胞的凋亡。3.miRNA-622对OVCAR8细胞的侵袭能力无影响。