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第一部分shRNA-CXCR4对人乳腺癌细胞基质细胞衍生因子-1受体CXCR4基因表达的影响目的:探讨shRNA- CXCR4对人乳腺癌细胞株MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435s CXCR4基因表达及蛋白表达的影响。方法:通过shRNA-CXCR4沉默CXCR4基因后,RT-PCR,Western-blot检测三株人乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435s的CXCR4mRNA及其蛋白的表达。结果:shRNA-CXCR4作用于人乳腺癌细胞株MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435s后能明显抑制CXCR4基因的mRNA及蛋白表达水平(P<0.05)。结论:shRNA-CXCR4能特异性抑制乳腺癌细胞的CXCR4mRNA及其蛋白的表达。第二部分shRNA-CXCR4作用于CXCR4基因后对乳腺癌细胞增殖活性的影响目的:探讨shRNA- CXCR4对人乳腺癌细胞株MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435s细胞增殖活性的影响。方法:细胞培养、RNA干扰技术、MTT法和流式细胞仪。结果:MTT显示shRNA-CXCR4作用于CXCR4基因后能明显抑制人乳腺癌细胞株MDA-MB-231、MDA-MB-435S、MCF-7的增殖(P<0.05);流式细胞仪显示shRNA- CXCR4作用于CXCR4基因后S期细胞数量明显减少(P<0.05),将更多的细胞阻滞在G0/G1期(P<0.05)。结论:shRNA- CXCR4作用于CXCR4基因后能明显抑制人乳腺癌细胞生长和增殖。第三部分shRNA-CXCR4作用于CXCR4基因对人乳腺癌细胞侵袭力的影响目的:研究shRNA-CXCR4作用于CXCR4基因对人乳腺癌细胞侵袭潜力的影响。方法:通过体外侵袭模型,测定人乳腺癌细胞株通过shRNA-CXCR4作用于CXCR4基因后穿透Matrigel的潜力。结果:shRNA-CXCR4作用于CXCR4基因后能明显降低人乳腺癌细胞株MDA-MB-231、MDA-MB-435S、MCF-7穿透Matrigel的能力(P<0.05)。结论:shRNA-CXCR4作用于CXCR4基因后能明显降低人乳腺癌细胞的侵袭潜力。第四部分shRNA-CXCR4作用于CXCR4基因对肿瘤血管生成潜力的影响目的:研究shRNA-CXCR4作用于CXCR4基因对人乳腺癌细胞株诱导血管内皮细胞形成管腔能力的影响。方法:应用人乳腺癌细胞株与人脐静脉内皮细胞(HUVEC)双室联合培养技术,观察人乳腺癌细胞株通过shRNA-CXCR4作用于CXCR4基因后诱导HUVEC形成管腔能力的影响。结果:shRNA-CXCR4作用于CXCR4基因后能明显抑制人乳腺癌细胞株MDA-MB-231、MDA-MB-435S、MCF-7诱导HUVEC形成管腔样结构的能力(P<0.05)。结论:shRNA-CXCR4作用于CXCR4基因后能明显抑制人乳腺癌细胞诱导管腔形成能力。第五部分CXCR4在乳腺癌的表达及其临床价值目的:研究人乳腺癌CXCR4的表达及与乳腺癌预后因子的关系。方法:收集44例乳腺癌标本,RT-PCR检测CXCR4mRNA的表达,Western-blot检测CXCR4的蛋白表达。免疫组化检测ER,PR, C-erbB-2。结果:CXCR4mRNA及蛋白表达与年龄、月经状况、肿瘤大小、组织学分级、ER,PR无相关(P﹥0.05);与腋淋巴结转移呈正相关,即腋淋巴结转移≥4个的CXCR4mRNA及其蛋白表达水平较腋淋巴结转移1-3个及腋淋巴结阴性有显著增高(P﹤0.05),两两比较q检验亦有显著差异(P﹤0.05)。与C-erbB-2表达呈正相关,即C-erbB-2(++/+++)组CXCR4mRNA及其蛋白表达水平较C-erbB-2(-/+)组有显著增高(P﹤0.05)。结论: CXCR4在促进乳腺癌转移中有重要作用;与C-erbB-2同时表达,可能预示患者的预后差。