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第一部分MMPs在颈椎类风湿关节炎滑膜成纤维组织中的表达情况目的:为观察金属基质蛋白酶家族（MMPs）在颈椎类风湿性关节肿的成纤维组织（rheumatoid arthritis fibroblast-like synoviocyte,RA-FLS）中的表达情况。方法:从颈椎RA的患者中的滑膜组织中提取并体外培养RA-FLS,运用免疫组织化学（IHC）,苏木精-伊红染色（HE）染色,蛋白质印记检测（WB）,免疫荧光检测（IF）方法来进行测定MMPs在颈椎RA成纤维组织中的表达情况。结果:我们在脊柱外科的手术中,获取Trauma-FLS及颈椎RA-FLS,应用IHC,WB方法检测了MMPs在FLS中的表达情况,发现MMPs在RA组明显高于Trauma组的患者。另外,我们还从滑膜组织中提取并培养了原代FLS后进行IHC,IF检测,结果同样显示MMPs在RA-FLS中表达高于Trauma-FLS。并提示了MMPs通过NF-κB通路参与颈椎RA滑膜的增殖,MMPs在颈椎RA-FLS的细胞核和细胞质中均有表达。小结:这些结果表明MMPs在颈椎RA-FLS的细胞核和细胞质中均有表达。第二部分羟基积雪草苷抑制佐剂性颈椎RA大鼠的骨破坏的实验硏究目的:为观察羟基积雪草酸（madecassoside,MC）对MMPS诱导的颈椎类风湿性关节中的滑膜成纤维细胞的迁徙及侵袭能力的影响。方法:将大鼠随机分成三组,分别为正常空白对照组,颈椎RA疾病模型组,羟基积雪草苷（MC）治疗组。并提纯MC溶液,通过观察大鼠的x线情况,一般情况及炎性肿胀评分来测定MC溶液对颈椎RA-FLS的作用,并利用Hoechst染色及双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）来确定MC通过调控MMPs来抑制大鼠颈椎RA的骨破坏情况。结果:MC可以缓解颈椎RA大鼠的症状,颈后部注射MC的治疗组大鼠关节肿胀程度明显减轻,寰枢关节直径和关节炎炎性评分则显著下降。并且,治疗的大鼠病理变化得到明显改善,软骨的损伤,滑膜增生得到缓解,炎性细胞浸润减少。小结:这些结果表明MC溶液可以抑制MMPs诱导的颈椎RA-FLS,起到抑制其骨破坏的作用。第三部分羟基积雪草苷通过NF-κB通路调控MMP-13的表达抑制佐剂性颈椎RA大鼠的骨破坏的实验硏究目的:利用大鼠造模模型以研究MC通过NF-κB通路的调控,来通过抑制MMP-13的表达以达到抑制佐剂性大鼠的骨破坏的研究。方法:利用双荧光素酶报告基因分析MC对转录因子NF-κB通路启动子结合活性的影响,证实通过NF-κB通路的下调以抑制MMP-13的表达。同时通过酶连检测法（ELISA）检测MC通过调控MMP-13对颈椎大鼠RA的炎性因子的分泌影响。通过染色质免疫共沉（Chromatin immunoprecipitation assay,Ch IP）进一步证实MC对NF-κB通路与MMP-13的作用。结果:RA-FLS细胞经过MC治疗处理后,与对照组比,CD4+、CD8+T淋巴细胞数量均有显著的大量增加,发挥了免疫凋节的作用,同时ChIP检测MC对NF-κB与MMP-13启动子结合活性的影响,促进RA-FLS细胞的调亡。在大鼠RA颈椎寰枢关节中,NF-κB被激活,呈信号表达,而经过MC溶液处理后,NF-κB的表达呈明显下调。跟NF-κB通路蛋白一样,实验结果显示,经过MC处理后24h和48h后,IL-2、IL-α和IFN-γ的分泌表达都有明显的增加,提示MC溶液分子能促进T淋巴细胞的增殖。小结:MC通过下调NF-κB通路以达到抑制MMP-13的表达,同时MC通过上述免疫调节及交叉调控以达到抑制颈椎RA-FLS的骨破坏作用。结论:MMPs在颈椎RA-FLS的细胞核和细胞质中均有表达,MC通过下调NF-κB通路以达到抑制MMP-13的表达抑制颈椎RA-FLS的骨破坏作用。