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目的:通过构建肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)腺病毒重组体,并建立犬下肢深静脉慢性血栓模型探讨HGF是否促进血栓内血管新生,加快血栓机化和再通。方法:1、取犬外周静脉血,分离其中白细胞,使用Trizol提取其中总RNA,反转录为cDNA后,PCR扩增目的基因HGF,将其克隆到腺病毒载体,并在293A细胞中包装腺病毒,经超速离心机离心纯化和浓缩病毒。2、选取正常家犬18只(15Kg-18kg),雌雄不限,利用介入Seldinger穿刺技术结合传统开放手术模拟髂静脉受压建立犬下肢慢性深静脉血栓形成动物模型。随机选取成功成模的18只下肢慢性深静脉血栓形成的家犬分为三组:对照组、抗凝组、治疗组,每组6只,分别注入生理盐水、低分子肝素、表达肝细胞生长因子的腺病毒,常规喂养28天后,经DSA造影观察血栓及侧支情况。应用实时荧光定量PCR技术检测HGF mRNA的表达水平,同时应用western blot检测静脉血栓内HGF蛋白表达变化;vWF免疫组化染色观察血栓再通毛细血管密度。结果:1、成功包装带有目的基因肝细胞生长因子的腺病毒,显微镜下可见绿色荧光,滴度约为1.0×10~8。2、成功建立下肢深静脉血栓形成模型并分别于14天、28天经DSA造影证实下肢深静脉血栓稳定。治疗后通过观察各组和取组织显示,治疗组于DSA造影下显示其血栓再通并侧支血管数明显优于对照组及抗凝组(p<0.05),荧光定量PCR显示治疗组HGF mRNA的表达水平明显高于对照组及抗凝组(p<0.05),从western blot结果可见治疗组HGF蛋白表达量较对照组及抗凝组升高(p<0.05),利用vWF免疫组化染色观察到其治疗组毛细血管数较对照组及抗凝组明显增多(p<0.05)。结论:1、肝细胞生长因子能明显促进慢性血栓内新生血管生成。2、肝细胞生长因子能明显加快慢性血栓机化和再通。