响应曲面法优化1-磷酸葡萄糖的合成及其生物效应研究

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葡萄糖含有羟基,对羟基进行修饰可得到不同的衍生物。葡萄糖磷酸酯具有抗肿瘤,抗病毒,免疫调节等多种生理功能,由于从自然界得到的糖的磷酸酯数量有限,种类也少,人们选择了人工合成。合成的葡萄糖磷酸酯在生物,医药及其他相关领域有着重要的应用价值。本课题针对目前使用的磷酰化试剂选择性不强,试剂有残留,产物不单一等问题,我们选择以葡萄糖为原料,选择性较强的三聚磷酸钠为磷酰化试剂,分别用尿素和从马铃薯提取的磷酸化酶为催化剂,两种方法合成了葡萄糖磷酸酯,并在单因素实验的基础上,利用响应曲面法以产物含量为指标优化了产物的合成条件。利用红外光谱、紫外光谱、热重分析、差热分析、核磁共振、电导率测定等手段对产物结构进行分析;利用油脂加速氧化法、清除超氧阴离子自由基和羟基自由基法考察了产物在体外的抗氧化能力,并考察了产物对绿豆种子发芽率、发芽种子的磷含量、淀粉酶活力生理指标的影响。本实验方法具有产物纯度较高,产物单一,使用的试剂低毒环保等优点。对葡萄糖磷酸酯的合成及应用有很好的借鉴意义。研究表明:1.响应曲面法优化以尿素为催化剂合成方法的最佳条件:温度为70℃,物料比为1.54:1,尿素为3.7g,在此条件下,实际产物含量为88.57%,与模型预测值89.7%相比,相对误差较小。以马铃薯磷酸化酶为催化剂合成法最佳条件:反应温度35℃,反应时间19h,物料比1.35:1,在此条件下,实际测得产物含量为69.24%,模型预测值69.62%,预测结果与实验结果一致。2.红外光谱、紫外光谱、热重分析、差热分析、核磁分析、电导率测试得出合成的产物为1-磷酸葡萄糖。3.体外抗氧化性研究实验中,油脂加速氧化法表明1-磷酸葡萄糖对抑制油脂的氧化的作用效果较好。超氧阴离子自由基清除最多可达到28.07%、而羟基自由基的清除率最高仅为13.83%,结果表明1-磷酸葡萄糖有一定的抗氧化性。4.对绿豆种子发芽生理指标影响实验表明:不同浓度的1-磷酸葡萄糖对绿豆种子发芽率的影响呈上升趋势;随着1-磷酸葡萄糖浓度的增大,绿豆种子的淀粉酶活性呈上升趋势。当浓度达到1000μmol/L时,种子淀粉酶活性达到最大,为171.53U;不同浓度的1-磷酸葡萄糖对绿豆种子磷含量的影响比较显著。当浓度为500μmol/L时,种子磷含量最高,为6.53%。而且同浓度下葡萄糖对种子发芽各种指标的影响均没有1-磷酸葡萄糖对种子的影响明显。说明1-磷酸葡萄糖对绿豆种子发芽是有非常好的促进作用的。
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