山楂叶总黄酮对游离脂肪酸损伤胰岛细胞保护作用的初步研究

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山楂叶总黄酮(HLF)是从山楂叶片中提取出来的主要活性物质。近年来大量的研究显示HLF在调节血脂代谢方面有良好的作用;研究结果也同样显示出HLF可以改善高脂大鼠的高胰岛素血症。然而HLF在具有多种对糖脂代谢有益作用的同时,其对脂毒性损伤的胰岛细胞是否有保护作用尚不明确。因此,本研究以胰岛β细胞为研究对象,观察和分析HLF对游离脂肪酸损伤后胰岛β细胞的保护作用。目的:观察HLF对脂毒性损伤的胰岛βTC3细胞抗凋亡作用的有效浓度及作用时间,以及对不同浓度的葡萄糖联合棕榈酸刺激胰岛βTC3细胞后胰岛素分泌能力的影响。方法:通过MTT法检测细胞活力观察棕榈酸(PA)对胰岛βTC3细胞造成的脂毒性损害,并进一步观察HLF的保护干涉作用。胰岛βTC3细胞分为正常细胞组、BSA组、PA组和HLF+PA组。分别使用10、30、50、100μg/ml的HLF与0.4mmol/L的PA共同作用24小时,筛选出HLF有效浓度。以及50μg/ml的HLF与0.4mmol/L的PA共同作用24、48、72小时,观察HLF的最佳作用时间。使用TUNEL法在荧光显微镜下观察0.4mmol/L PA作用后,以及和50μg/ml HLF共同作用后细胞的凋亡,并计算凋亡指数;放免法分析各组在5mmol/L和22.4mmol/L浓度的葡萄糖刺激后胰岛细胞分泌胰岛素能力;Western Blot法观察PA和HLF对Bcl-2/Bax蛋白表达的影响。结果:1.MTT结果显示:10-100μg/ml的HLF对0.4mmol/L PA诱导的胰岛βTC3细胞损伤均有保护作用,各浓度的HLF和PA作用后细胞的活力均高于单独PA组(P<0.05),并且50μg/ml的HLF与0.4mmol/L PA共同处理胰岛βTC3细胞24小时保护作用最好。2.TUNEL结果显示:50μg/ml HLF和0.4mmol/LPA共同处理后的胰岛细胞凋亡指数比PA处理后的凋亡指数低,具有统计学意义(P<0.05)。3.50μg/ml的HLF和0.4mmol/L PA共同处理后的胰岛βTC3细胞在5mmol/l和22.4mmol/l浓度葡萄糖的刺激下,胰岛素分泌值均高于PA作用后(P<0.05);并且在5mmol/l浓度的葡萄糖刺激下,各组细胞的胰岛素分泌值都高于22.4mmol/l浓度组。4.Western Blot方法观察到PA组中抑凋亡蛋白Bcl-2的表达较弱,促凋亡蛋白Bax的表达较明显,用HLF保护干预后,抑凋亡蛋白Bcl-2的表达较明显,促凋亡蛋白Bax的表达较弱,并且HLF进行保护后Bcl-2/Bax的比值高于PA组(P<0.05)。结论:HLF和PA共同作用后,可以减少PA诱导的胰岛βTC3细胞的活力下降,同时也减少了胰岛βTC3细胞凋亡,此作用可能与凋亡蛋白Bcl-2/Bax相关,并且也观察到HLF减少了PA造成的胰岛βTC3细胞胰岛素分泌能力下降,而其具体作用机制有待进一步研究。
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