茶叶中甲基化EGCG的分析方法建立与资源化学研究

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甲基化EGCG是儿茶素类的一种,它主要包括EGCG3 " Me、EGCG4 " Me。EGCG3 " Me、EGCG4 " Me为白色粉末状物质,易溶于水和有机溶剂,它们是EGCG的两种甲基化衍生产物,分子结构分别为(-)-表没食子儿茶素3-O(3-O-甲基)没食子酸醋(C-1)和(-)表没食子儿茶素3-O(4-O-甲基)没食子酸醋(C-2),它们具有高效的抗过敏功效,尤其是抗花粉过敏。本研究旨在建立一套准确、高效的茶叶中甲基化EGCG的HPLC检测方法,并利用此方法对种植在湖南地区的部分茶树品种资源进行含量分析,以期筛选出高含量甲基化儿茶素的特异茶树品种资源。本文还对影响甲基化EGCG含量的一些内外因子进行了深入的探讨,对甲基化EGCG的研究与利用具有重要的理论意义和实用价值。获得的主要研究结果如下:(1)建立了茶叶中甲基化EGCG的HPLC分析方法,色谱分析条件为:流动相:0.02mol/L磷酸二氢钾溶液:乙腈,梯度洗脱,色谱柱:C18 5μm ID4.6*250mm;,流速:1.0ml/min,柱温:30℃,用磷酸调pH=2.5,检测波长278nm。该方法可以清晰分离EGCG3"Me和EGCG4"Me,且准确度、精确度好。(2)本研究对117个不同来源的茶样进行了甲基化EGCG分析,其中只有16个的EGCG3"Me含量在检测限(0.01%)之下,占总数的13.7%,而高于0.1%的为40个,占总数的34.2%,含量在0.3%以上的有18个,占总数的15.4%,其中含量最高的为C48,达到了1.7%;含有EGCG4"Me的品种只有10个,只占总数的8.5%,其中含量最高的是C45,含量为0.55%,最低的是C69,只有0.036%。(3)同一茶样,蒸青固样的茶叶EGCG3"Me的平均含量为0.120%,冷冻干燥固样的茶叶EGCG3"Me的平均含量为0.127%。方差分析结果表明,两者对茶叶中EGCG3"Me的含量影响不显著。(4)不同季节采摘的茶叶中甲基化EGCG的HPLC分析发现,同一品种、不同季节的茶叶中EGCG3"Me含量,夏季叶含量相对最高,秋季叶次之,春季叶最低,且差异达到极显著水平。(5)茶树不同叶位EGCG3"Me含量变化显著,表现为在第三叶、第四叶含量最高,其次是第五叶,而在茶梗中含量极低。(6)绿茶加工过程中EGCG3"Me含量变化研究表明,不同加工工序对茶叶中EGCG3"Me的含量影响极显著,表现为摊放叶时含量最高,杀青叶时有所下降,揉捻叶时基本不变,最后到干燥叶时再度下降,但下降幅度很小。
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