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目的
探讨视网膜内界膜剥除术中玻璃体腔内使用含碘吲哚青绿(indocyaninegreen,ICG)和无碘吲哚青绿(infracyanine green,ifCG)辅助染色内界膜对视网膜影响的差异。
方法
选取健康青紫蓝兔48只,随机分为6组,每组8只,分别为BSS组、ifCG组、ICG组、BSS+L组、ifCG+L组及ICG+L组。各组动物均以左眼为实验眼,行经扁平部玻璃体切除术后,BSS组玻璃体腔内注入无菌手术平衡液(balancedsalt solution,BSS)0.1 ml,作为对照组;ifCG组玻璃体腔注入0.1 ml 0.5%ifCG,染色黄斑部视网膜内界膜2 min后,BSS灌洗玻璃体腔;ICG组玻璃体腔注入0.1ml 0.5%ICG,染色视网膜黄斑部内界膜2 min后,BSS灌洗玻璃体腔; BSS+L组、ifCG+L组、ICG+L组分别在BSS组、ifCG组、ICG组的手术操作基础上,即染色视网膜并灌洗玻璃体腔后,用玻璃体切除术中应用的眼内导光纤维以5800mW/cm<2>照射视网膜黄斑部10 min。术后1 d、14 d分别行组织病理学检查、透射电子显微镜检查和闪光视网膜电图检查。
1.组织病理学检查:术后1 d及14 d,每组动物中随机各选2只处死,眼球取材后经固定、脱水、透明、包埋、切片后,行苏木素.伊红染色。随机选取切片,观察视网膜形态改变,测量并比较各组间的黄斑部视网膜厚度。
2.透射电子显微镜检查:术后1 d及14 d,每组动物中随机各选2只处死,取黄斑部视网膜组织经固定、脱水、浸透、包埋、半薄切片染色定位后,制作110nm超薄切片,醋酸双氧铀和枸橼酸铅双重染色后,透射电子显微镜下观察视网膜超微结构的改变。
3.闪光视网膜电图检查(flash electroretinogram,fERG):术后1d及14d,每组动物中随机选取4只散大瞳孔暗适应后分别行双眼fERG检查。每眼重复检。查5次,分别记录fERG中双眼b波波幅和振荡电位(oscilatory potentials,OPs),以左眼与右眼测量数值平均数的比值作为左眼视网膜功能的指标,比较各组间此比值的差异。
结果
1.眼组织病理学检查:
(1)术后1 d:与BSS组相比,ifCG组和ICG组的神经节细胞层和神经纤维层轻度水肿,内核层外核层细胞排列较紊乱,视网膜厚度均增加(P<0.05),但ifCG 组与ICG组之间无明显形态区别和视网膜厚度的差异(P>0.05)。与单纯染色组(ifCG组、ICG组)相比,染色联合光照组(ifCG+L组、ICG+L组)神经纤维层空泡变性增加,神经节细胞明显水肿,视网膜厚度增加(P<0.05)。
(2)术后14 d:与BSS组相比,ifCG组和ICG组神经纤维层空泡化,外核层明显变薄,各层排列欠规整,视网膜厚度均较BSS组增加(P<0.05)。但ifCG组与ICG组之间无明显形态区别和视网膜厚度的差异(P>0.05)。与单纯染色组(ifCG组、ICG组)相比,染色联合光照组(ifCG+L组、ICG+L组)神经纤维层和神经节细胞层萎缩程度增加,外核层排列更加紊乱,视网膜厚度降低(P<0.05)。
2.透射电子显微镜检查:
(1)术后1 d:BSS组各层细胞结构清晰规整;ifCG组外核层细胞核间隙见少量空泡,外节排列较整齐,色素上皮细胞内含有较多的层状结构。ICG组外核层轻度变稀疏,外节少量膜盘排列欠规整,色素上皮细胞内含有较多的层状结构。Bss+L组外核层排列整齐,外节见轻度肿胀,色素上皮细胞内含有大量的层状结构。ifCG+L组外核层细胞肿胀,细胞质浓缩,外节排列不规整,色素上皮细胞内含有大量的层状结构。lCG+L组外核层细胞间质肿胀变宽,外节排列欠规整,色素上皮层轻度水肿。
ICG组、ifCG组较BSS组有明显的超微结构改变,而且ICG组的超微结构改变较ifCG组明显;眼内光照后,BSS+L组、ifCG+L组和ICG+L组的视网膜超微结构改变依次明显,而且分别较BSS组、ifCG组、ICG组改变更为明显。
(2) 术后14 d:BSS组视网膜结构依旧清晰规整。ifCG组外核层细胞核间隙仍见少量空泡,细胞间隙增大,外节膜盘排列整齐,色素上皮细胞内含有较多的空泡样结构。ICG组外核层稀疏变薄,细胞核间隙增大,外节稀疏变薄,色素上皮细胞内有空泡存在。BSS+L组外核层内少量空泡,外节可见个别空泡存在,色素上皮细胞高度均一。ifCG+L组外核层细胞指状稀疏,胶质细胞增殖,外节部分膜盘裂隙增大,色素上皮细胞内有空泡存在。ICG+L组外核层细胞指状稀疏,胶质细胞增殖,外节排列不规整,色素上皮细胞内有空泡存在。
ICG组、ifCG组较BSS组仍然有明显的超微结构改变;但各组间差异变小;联合眼内光照后,染色组的超微结构改变更加明显,各组比较结果与1 d时相似,但差异更小。
3.闪光视网膜电图检查:
(1)术后1 d:各组暗适应fERG b波波幅比值和Opa比值的染色因素之间比较显示,ICG染色的两组(ICG组,ICG+L组)较ifCG染色的两组(ifCG组,ifCG+L组)降低,且均小于相应的两个对照组(BSS组、BSS+L组);而相应的未光照组和经过光照组的组间比较,经过光照的3个组均较其对应组降低,差异有显著意义。染色因素和光照因素没有明显的交互影响。
(2) 术后14 d:各组暗适应fERG b波波幅比值和Ops比值的染色因素之间比较显示,ICG染色的两组(ICG组,ICG+L组)与ifCG染色的两组(ifCG组,ifCG+L组)之间差异无显著意义,均较相应的两个对照组(BSS组、BSS+L组)降低;而相应的未光照组和经过光照组的组间比较,差异无显著意义。染色因素和光照因素仍未见明显的交互作用。
结论
1.ICG和ifCG均对视网膜有毒性作用。但在术后早期,ICG视网膜毒性作用大于ifCG。
2.ICG和ifCG均未增加光照对视网膜的毒性作用。