组培条件下苹果潜隐性病毒的分布特征及传播途径研究

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目前,我国苹果的栽培面积和总产量均居世界前列,但单产低,品质差,病毒病是造成这一现象的重要原因之一。许多研究者提出,实行无毒化栽培可从根本上防治苹果病毒病。目前苹果无毒苗大多来自于离体保存的无病毒原种。但实际生产中发现,无病毒原种经长时间的保存和扩繁,会出现病毒再次检出现象,这就给苹果无毒化生产带来一定的安全隐患。为此,准确掌握组培条件下苹果潜隐性病毒的体内分布、含量变化因素及传播途径,有利于明确无病毒原种的适宜保存条件和更好地预防病毒传播,进而推进无毒化栽培的进程。本研究以带毒苹果组培苗为试材,运用FQ-PCR和常规RT-PCR技术,研究分析了组培苗中苹果潜隐性病毒的分布和含量变化规律及病毒传播途径。主要结果如下:1.组培条件下ASGV和ACLSV的分布与含量变化的研究试验以同时携带ASGV和ACLSV的苹果砧木组培苗P22为试材,运用FQ-PCR技术,研究了组培苗不同部位以及不同培养天数和培养温度下上述两种病毒的含量变化。结果表明:(1)在组培条件下,两种病毒在不同部位的相对含量存在差异,且病毒种类不同,分布规律亦不同。其中,ASGV在顶端1cm、中部、基部1cm的相对含量由高至低为顶端>中部>基部,表现为中上部积累特性;而ACLSV相对含量表现为基部>中部>顶部的中下部积累特性。(2)不同培养温度下组培苗内ASGV和ACLSV的含量存在差异。ASGV和ACLSV含量由高至低均表现为:5℃>25℃>32/38℃>35℃。在低温培养下苹果病毒含量较高,高温抑制病毒复制。2.变温处理对苹果潜隐性病毒的脱除效果研究试验以同时携带ASGV、ASPV、ACLSV的八棱海棠、小金海棠、华红和JAZZ4个砧木和品种组培苗为试材,采用32/38℃的变温处理,运用RT-PCR技术对组培苗进行跟踪检测,结果表明:变温处理后检测无毒的苗子仍有病毒复现的可能。其中ASGV最先检出,其次为ACLSV,ASPV检出时间最晚。对变温处理脱毒后的苗子进行跟踪检测、定期抽检或更新十分必要。3.组培条件下ASGV和ACLSV的传播途径研究试验以同时携带ASGV和ACLSV的苹果砧木组培苗P22和珠美海棠无毒组培苗为试材,人为模拟了5种方式进行传毒,研究了组培条件下病毒可能的传播途径及传毒速度。结果表明:(1)组培条件下,ASGV和ACLSV可经微嫁接、根系接触、工具交叉使用、培养基介质以及汁液传毒,且传毒几率由高至低为:微嫁接>根系接触>工具交叉使用>培养基介质>汁液传毒。(2)组培条件下,无论于植物生态学的上端还是下端接种苹果病毒,接种5天时,在近接种端均可检出病毒,10天时病毒检出率就可达到90.00%左右。且接种下端时病毒的传输速率快于接种上端。ASGV较ACLSV传毒更快,侵染率更高。
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