论文部分内容阅读
目的：研究紫花牡荆素(Casticin)对人小细胞肺癌NCI-H446细胞系肿瘤干细胞样细胞(Lung cancer stem like cells,LCSLCs)的自我更新能力及β-catenin表达的影响,初步探讨紫花牡荆素抑制肺癌干细胞特性作用机制。方法：体外培养人肺癌NCI-H446细胞系,采用干细胞条件培养基悬浮培养法富集并得到肺癌球形成细胞,并鉴定作为LCSLCs。肿瘤球形成试验检测LCSLCs的自我更新能力。Western blot分析NCI-H446细胞系肿瘤球形成细胞以及非分选细胞的干细胞生物标志物CD133,CD44蛋白表达状态。本文建立裸鼠皮下移植瘤模型来检测人肺癌NCI-H446细胞系细胞和肺癌球形成细胞的裸鼠皮下成瘤的能力：并进行移植瘤组织切片,HE染色,光学显微镜下检测病理组织学形态。MTT法测定Casticin对LCSLCs增殖活性的影响。肿瘤球形成实验测定Casticin对LCSLCs自我更新的影响。 Western blot分析Casticin对LCSLCs的CD133和CD44蛋白表达的影响。Western blot分析对照检测NCI-H446细胞系细胞与LCSLCs的β-catenin蛋白表达以及Casticin对β-catenin蛋白表达的影响。结果：1.在干细胞条件培养基悬浮培养中,人肺癌NCI-H446细胞系细胞成球生长,形成肺癌球。2.肿瘤球形成试验结果表明人肺癌NCI-H446细胞系肺癌球形成细胞具有自我更新能力。3.与人肺癌NCI-H446细胞系细胞相比,人肺癌NCI-H446细胞系肺癌球形成细胞干细胞标志物CD133和CD44蛋白农达水平更高。4.裸鼠皮下成瘤实验证明了源白人肺癌NCI-H446细胞系肺癌球形成细胞具有高致瘤特性。5.Casticin优先抑制LCSLCs细胞增殖活性。6.Casticin具有抑制LCSLCs自我更新作用。7.Casticin显著下调干细胞标志蛋白CD133和CD44的表达,呈剂量依赖刑。8.人肺癌NCI-H446细胞系肺癌球形成细胞高表达β-catenin蛋白,Casticin以剂量依赖方式抑制其β-catenin蛋白表达。结论：1.干细胞条件培养基悬浮培养得到的人小细胞肺癌NCI.H446细胞系肺癌球形成细胞具有肺癌干细胞特性。2.多甲氧基黄酮化合物Casticin具有抑制I.CSLCs自我更新作用。3.Casticin抑制LCSLCs自我更新作用与其下调肿瘤干细胞信号分子β-caten in和干细胞标志物CD133、CD44蛋白表达相关。