细胞自噬(Autophagy)是广泛存在于真核生物中的一种溶酶体对细胞内自身结构进行吞噬和降解的现象。它既是细胞的一种自我保护机制,在一定条件下细胞自噬程序性死亡也是一种区别于细胞凋亡的Ⅱ型程序性细胞死亡(Programmed cell death, PCD),因此具有重要的生物学功能。它参与生物个体的发育、疾病的发生、个体的衰老和细胞分化,同时也在生物体度过恶劣环境、抵御病原微生物等过程中发挥重要作用。Atg6 (autophagy-related-gene-6)是细胞自噬过程中的重要调节分子,具有自噬守门者之称,在哺乳动物细胞中具有非常重要的生理功能。白噬相关蛋白Atg8定位于自噬体膜,在细胞发生自噬的过程中随同自噬体一同进入液泡而被降解,因此常常作为研究细胞自噬的标记物。棉铃虫(Helicoverpa armigera),鳞翅目夜蛾科昆虫的一种,是我国的重要害虫之一,对农作物造成了严重的危害。但目前有关Atg6对昆虫细胞自噬的调节及棉铃虫Atg6基因对昆虫生长发育的影响研究还尚未见报。本研究通过RNA干扰技术使棉铃虫Atg6基因表达沉默,以探究该基因的沉默对虫体生长发育的影响。首先选取干扰片段,体外合成棉铃虫Atg6特异性dsRNA,并采用显微注射仪将dsRNA注射到幼虫体内,随后运用qRT-PCR技术检测Atg6mRNA转录子的丰度,以测定Atg6基因表达沉默的水平,最后通过检测体重变化、产卵量和孵化率这三项指标来研究Atg6表达沉默对棉铃虫生长与繁殖的影响。同时采用qRT-PCR技术研究了棉铃虫Atg6干扰中达到最佳干扰效果的剂量。结果显示,体外合成的棉铃虫Atg6-dsRNA注射到幼虫体内48h后起到了显著的干扰效果,并且使棉铃虫Atg6达到最佳干扰效果的剂量为2μg。 幼虫生长发育与成虫繁殖指标的检测结果表明,Atg6基因被干扰后幼虫体重与对照相比无明显差别,但成虫产卵量和孵化率与对照组相比明显降低。与此同时,本文还研究了Atg6对昆虫细胞白噬的调节。首先研究的是斜纹夜蛾细胞TH和粉纹夜蛾细胞TnH5中Atg6基因表达沉默对Atg8蛋白表达的影响,接着研究了TH细胞中Atg6的超表达对细胞自噬的影响。实验中同时采用了western-blot和qRT-PCR技术检测Atg8蛋白的表达。结果显示,当Atg6基因沉默或者超表达时,细胞中Atg8蛋白的表达量都会下降,即细胞的白噬水平下调了。本研究结果表明,自噬相关基因Atg6在昆虫细胞自噬的过程中起到了至关重要的作用,并且Atg6基因参与棉铃虫繁殖,因此Atg6有可能成为未来新型杀虫药物的靶标,同时本研究还可以为昆虫生理学研究和害虫治理提供重要的参考。