铜绿假单胞菌NY3胞外分泌物对烃类降解的作用研究

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铜绿假单胞菌胞外分泌物质丰富,除鼠李糖脂被充分认识和研究外,其他胞外分泌物与烃类降解效率的关系,目前未见报道。本实验室前期发现NY3菌以难降解有机物为唯一碳源生长时与种子液接种量密切相关。基于前期实验现象,可推测铜绿假单胞菌NY3代谢难降解有机物速度应与种子液中的胞外分泌物有关。本论文旨在通过实验揭示除鼠李糖脂外,铜绿假单胞菌NY3细胞生长过程中所产生的其他胞外分泌物与烃降解效率的关系,研究工作对于深入理解难降解有机物的代谢机理具有理论和现实意义。本论文以NY3菌株为受试菌种,以单一烷烃及混合烃为降解对象,借助于紫外光谱、GC、飞行质谱等研究手段展开相关工作,获得以下成果。(1)研究发现,NY3菌在LB和“烃+无机盐”两种培养基生长时所分泌的胞外物对烃降解有促进作用,尤其是对长链烃的促进作用明显。胞外分泌物对烃降解的促进作用主要表现在前期,其能促进细胞快速适应新环境。外加从两种培养液中提取的大分子和小分子活性物,能提高NY3菌对十四烷的去除率。(2)研究发现NY3菌在两种培养基中生长时,均可向胞外分泌具有一定表面活性的蛋白质类物质。质谱鉴定结果表明,在两种培养基中生长时,NY3菌均可向胞外分泌小分子活性物质绿脓菌素和吩嗪-1-酰胺吩嗪,同时分泌异咯嗪系列化合物1-3-二羟基-6,7-二甲基异咯嗪(还原态黄素)和1-3-二羟基-6,7-二甲基-10-甲基-异咯嗪。LB培养基中会分泌更多的吩嗪-1-甲酰胺,而“十六烷+无机盐培养基”中易分泌更多异咯嗪类小分子。(3)与十四烷为唯一碳源降解体系相比,共存碳源戊二酸、氨基丁酸、乳酸钠、丙酮酸钠等均能使生长体系中细胞量增加,因为戊二酸共存体系容易分泌更多的绿脓菌素,因而有戊二酸存在时,可使20 h十四烷的比降解率提高1.15倍。(4)从戊二酸共存生长液中提取到的绿脓菌素能使细胞生长液中氧化还原活性物质电位处的电流量增加,绿脓菌素参与体系中氧化还原酶的电子传递系统。因而,可使NY3菌活体细胞20 h对十四烷的降解率最大提高39%。使菌体粗酶液氧化还原酶比活力最大提高89.6%。
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