拟南芥ckrc突变体的筛选和初步研究

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在植物的整个生命活动中,生长素从多个方面影响植物的生长和发育。生长素的发现距今已有100多年历史,但由于生长素合成途径网络的复杂性,生长素的合成途径至今仍有很多环节和步骤是未知的。根据前期的工作基础,实验室建立了一整套完整的筛选体系,并在含有细胞分裂素培养基上分离到了一株根呈现卷曲表型的突变体(Cytokinin induced root curling1),将其命名为ckrcl。CKRC1/TAAl编码色氨酸氨基转移酶(tryptophan aminetransferase, TAA),介导IPA合成途径中吲哚-3-丙酮酸(IPA)的合成。利用这一筛选体系继续筛选与生长素和细胞分裂素相关的突变体,进而加深对生长素和细胞分裂素的认识。利用T-DNA突变体库进行筛选,大约初筛350,000粒突变体库中的种子后,分离到8株主根具有卷曲表型的突变体,并对其中的3个(110,111,424)做了深入的分析。Tail-PCR克隆到111突变体的插入位点位于At1g17110与At1g17120之间的非编码区域;424突变体的插入位点在At1g15780的启动子区域;110突变体的插入位点在At5g49665基因上。T-DNA插入纯杂合鉴定结果为110,111是插入纯合体,但424是插入杂合体。遗传分析证明424突变体克隆到的候选基因与表型不连锁。化学互补实验结果显示110突变体能被玉米素(ZT)互补,111能被萘乙酸(NAA)互补,而424不能被任何激素互补。与此同时,通过生长抑制曲线,发现111在一定浓度的NAA处理下根长恢复到野生型的水平;424对2,4-D的处理更敏感,而110的根长受到ZT的显著抑制。等位杂交实验显示,111和auxl-7的杂交F1代出现了根卷曲的表型,而424与pin2的杂交F1代也出现了根卷曲的表型。说明111突变体是auxl的等位,而424则是pin2的等位突变体。关于110突变体所具有的卷曲、伸长的主根,偏上生长的子叶,伸长的下胚轴等缺陷表型,其研究工作还在进一步的深入之中。
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