【摘 要】
:
利用大肠杆菌启动子探针载体pKK232-8,从极端嗜盐古生菌的基因组DNA中分离得到一个在大肠杆菌中具有启动子活性的RM07 DNA片段,DNA序列分析表明它既含有典型的真细菌启动子-35区和-10区保守序列,又具有嗜盐古生菌启动子特征序列DPE(distal promoter element)。 在嗜盐古生菌、大肠杆菌和酿酒酵母中分别以β-半乳糖苷酶基因(bgaH)、二氢叶酸还原酶基因(d
论文部分内容阅读
利用大肠杆菌启动子探针载体pKK232-8,从极端嗜盐古生菌的基因组DNA中分离得到一个在大肠杆菌中具有启动子活性的RM07 DNA片段,DNA序列分析表明它既含有典型的真细菌启动子-35区和-10区保守序列,又具有嗜盐古生菌启动子特征序列DPE(distal promoter element)。 在嗜盐古生菌、大肠杆菌和酿酒酵母中分别以β-半乳糖苷酶基因(bgaH)、二氢叶酸还原酶基因(dhfr)、氯霉素抗性基因(cat)、G418抗性基因(neo)为报告基因,通过构建各种RM07片段和报告基因相融合的重组质粒、酶活测定、抗性水平检测以及逆转录PCR(RT-PCR)检测报告基因转录等方法,研究了RM07 DNA片段的启动子功能,结果证明RM07片段在三域模式生物——古生菌(嗜盐古生菌)、真细菌(大肠杆菌)和真核生物(酵母菌)中均具有启动子活性,能够驱动不同报告基因的转录和表达。 在嗜盐古生菌、大肠杆菌和酵母菌中分别对RM07片段进行了启动子缺失突变分析,构建了一系列RM07不同缺失片段插入报告基因上游的重组质粒,检测了RM07不同缺失片段的启动子活性大小,在三域模式生物中分别浓缩定位了RM07片段中对于启动子活性有影响的重要功能区。结果表明:含有-35区和-10区特征序列的40bp区段是RM07片段在大肠杆菌中具有基础启动子活性的重要功能区;嗜盐古生菌启动子特征序列DPE对于RM07片段在嗜盐古生菌和酵母菌中的启动子活性都是必需的功能元件;RM07片段中的-35区、-10区特征序列和嗜盐古生菌启动子特征序列DPE在启动子功能上具有一定的相关性。 在大肠杆菌中对RM07片段进行了定点诱变分析,结果表明不同碱基突变对RM07片段的启动子活性产生不同的影响,从而进一步精确定位了R材07片段中对在大肠杆菌中的启动子功能有重要作用的关键碱基,初步鉴定了可能的转录起始位点,并且通过改造RM07片段的碱基组成成份大幅提高了其在大肠杆菌中的启动子活性。 本研究还成功地将热化学研究的重要方法—微量量热技术应用于启动子的结构与功能研究,进一步证实了RM07片段在大肠杆菌中的启动子功能,获得了不同的碱基突变影响RM07片段在大肠杆菌中的启动子活性的精确数据,热化学研究结果与生物学的研究结果基本一致。本研究也为启动子功能的研究提供了一种新的更加灵敏便捷的化学与生物学相结合的方法。
其他文献
在1979,肯特大学液晶研究所的Brown GH和Wolken JJ发表了他们的著作《液晶与生物结构》,在此书中,他们系统的总结了当时液晶态在生物有机体内研究的全部进展,此书成为该领域的权威著作。在1978和1979年,液晶在鸡胚发育中存在的发现引起学术界的注意。该工作首次报道了在胚胎器官和组织发生中,液晶态大量分布与肝脏、卵黄囊、血液、肾脏(包括中肾和后肾)、大脑和小脑、以及其他大约二十余种发育
嗜麦芽假单胞菌(Pseudomonas maltophila)是一种广泛分布于自然界的G-细菌,具有很强的代谢活性及广泛的适应能力,其代谢产物丰富,可产生多种有实用价值的酶,包括蛋白酶、淀粉酶、酪氨酸酶、脂肪酶等。本实验室已成功地从该菌中克隆到编码酪氨酸酶的基因mel,构建了产生具有重要应用价值的黑色素工程菌株E. coli/pWSY,为了进一步提高黑色素的产量,本研究从该菌中克隆到高启动子活性的
近几十年来,半导体量子限制结构的优异物理特性凭借其在光电、生物医学等领域的潜在广泛应用价值,得到了人们的广泛关注和深入研究。由Ⅱ-Ⅵ族半导体材料组成的具有核壳结构的CdSe/ZnS复合量子点,具有在室温下的极佳稳定性和出色的发光效率(荧光量子产率),其非线性光学特性和光学瞬态相干效应深受人们的青睐。本论文详细地分析研究了这种球形半导体量子限制结构中的载流子的光跃迁动力学过程以及对应的光学瞬态相干效
蝎毒素是一类由20-90个氨基酸通过3或4对二硫键铰链而成的具有多种生物活性的小分子多肽。大多数蝎毒素的三维结构是由1个a螺旋和2-3条反向平行β折叠组成的稳定而致密的球状空间结构。它们可以选择性、特异性的与细胞膜上的离子通道结合,是研究离子通道的分子探针,具有重要的理论与应用研究的价值。 根据TsTXKβ和AaTXKβ的保守序列设计引物,运用PCR方法从本室已构建的东亚钳蝎(Buthus
多年来,由低能加速器产生的能量仅为keV量级的离子注入技术一直只应用在金属材料的改性上。20世纪80年代后期,由中国学者开创的低能离子束生物学效应及诱变育种的理论及应用研究突破了这个局限。通过近十多年国内外多个实验室的研究,低能离子生物学作用的研究及应用取得了很大的进展。包括我们实验室在内的很多研究表明:10—100keV的低能离子(e.g.N,C,Ar ions)可以引起质粒DNA、氨基酸、病毒
本文以异硫氰酸荧光素标记的凝集素(主要为伴刀豆凝集素、麦芽凝集素和大豆凝集素)为探针,对蓝猪耳和烟草等的雌、雄细胞以及胚胎细胞表面凝集素受体进行了定位,并利用共聚焦激光扫描显微术(CLSM)、冷电荷耦合仪(CCD)和动态录象CCD获得图象,以MetaMorph和Pro-Plus软件进行图象和数据分析,以探讨凝集素受体的基本分布模式及与被子植物双受精的可能关系。主要结果如下: 1.利用蓝猪耳的
pHH205是本实验室从盐生盐杆菌J7中分离获得的一种古生菌质粒,该质粒具有一般自然质粒所不具备的高拷贝数、高稳定的特征。本研究利用多种组合的酶切分析,绘制了较为详细的酶切图谱。根据图谱确定并构建了涵盖整个质粒的七个重叠克隆,采用Primer Walking策略分别进行序列测定。七段序列数据经过拼接后得到了完整的质粒pHH205核苷酸全序列,序列全长为16341bp(GenBankNo.AY048
长期以来人们一直在探索着生物大分子的结构与其功能之间的关系。一般情况下,只有知道生物大分子的原子水平结构才能更好地了解其功能。所以生物大分子高分辨结构的研究对我们进一步了解病毒的装配过程和病毒在感染过程中在细胞内的一系列活动都至关重要。 最早用于研究生物大分子高分辨结构的是X射线晶体学。可用于研究三维晶体的原子结构。但要求被研究的生物大分子能够生长成具有一定尺寸大小的三维晶体。由于这一局限,
本篇博士论文主要研究随机过程的核密度估计的大偏差,尤其是对相依随机过程,主要结果是首次把独立同分布情形下的大偏差结果推广到了相依情形。 给定一列Rd值的平稳序列(Xk)k≥0,其边缘分布为P(X0∈dx)=f(x)dx,其中f未知,则f的核密度估计量定义如下: fn*(x):=1/n sum from k=1 to n 1/(hn) K ((x-Xk)/h)其中K是某个事先给定的Rd上