论文部分内容阅读
人的皮肤和人体的其他器官一样,都经历着衰老。它和身体的其他器官不同的是,它直接和外界环境相接触,因此皮肤的老化同时受到外界环境的影响,在自身的时间性老化的基础上外界因素加速皮肤的老化。其中来自太阳的紫外线是导致皮肤光老化的最主要的外界因素。临床表现为深大、沟槽样的皱纹,皮肤松弛,呈皮革样外观,顺应性下降,脆性增加,损伤愈合能力下降等。组织学水平可见细胞外基质成分的异常改变。在过去的十几年里,研究表明皮肤的时间性衰老和光老化具有共同的分子基础。皮肤的生理衰老和光老化的分子机制的趋同性为新的抗衰老治疗方法提供了基础。强脉冲光(intense pulsed light,IPL)是一种连续性多波长的非相干性光,波长范围在500~1200nm之间。使用连续波长的强脉冲光在低密度下进行非剥脱、非侵入性的治疗技术称为光子嫩肤术(photorejuvenation)。该项技术因其独特的的非侵入性,应用越来越普遍。其治疗的安全性及疗效也就成为医患关注的焦点。有文献报道强脉冲光可以使皮肤真皮层的胶原含量增加,但对胶原含量未进行定量研究,并且强脉冲光对成纤维细胞的其他生物学效应也未曾报道,本实验的目的在于通过研究强脉冲光对成纤维细胞增殖效应及胶原合成能力的影响,探讨其抗衰老的机制,为强脉冲光除皱提供理论基础。实验方法:培养成纤维细胞,取3~6代,实验设立对照。用不同波长的强脉冲光照射培养的成纤维细胞。1.本实验观察的指标如下:(1)细胞形态的观察在倒置显微镜下观察细胞形态的变化(2)细胞活性的检测MTT法检测照射后细胞的生长活力的变化(3)细胞周期的检测流式细胞仪检测细胞周期的变化及各时相所占的比例(4)PCNA的表达免疫组织化学染色检测成纤维细胞的PCNA表达(5)胶原蛋白的定量分析3H脯氨酸掺入法测成纤维细胞胶原蛋白的合成(6)Ⅰ型胶原蛋白mRNA的表达RT—PCR技术检测Ⅰ型胶原蛋白mRNA的表达2.本实验所得到的结果和结论:(1)强脉冲光对成纤维细胞形态的影响亚融合状态的成纤维细胞经过强脉冲光照射后,继续孵育24小时,经倒置显微镜观察细胞形态未见明显变化。(2)强脉冲光对成纤维细胞增殖活性的影响照射组在经过五个不同能量的光照射后,在6h,12h检测细胞活性没有明显变化,从24h后,细胞活性显著增加,并且具有统计学意义(p<0.05),并且与照射能量成正比。(3)强脉冲光对成纤维细胞PCNA表达的影响亚融合状态的成纤维细胞经过强脉冲光照射后,继续孵育24小时,用免疫组织化学染色的方法可见照射组成纤维细胞PCNA表达上调(p<0.05),不同能量照射后各组间无显著差异(p>0.05)。(4)强脉冲光对成纤维细胞周期的影响亚融合状态的成纤维细胞经过强脉冲光照射后,继续孵育24小时,用流式细胞仪检测细胞周期,并对各时像进行比较,强脉冲光照射组细胞数明显高于对照组,而S期和G2-M期细胞比数明显高于对照组,G1期细胞比数明显低于对照组,经统计学分析有显著性差异(P<0.05)。(5)强脉冲光对成纤维细胞胶原蛋白合成的影响在27J/cm2以前,各组间两两比较有显著差异,从低能量到高能量各组间,有上升趋势,并与能量成正比,在27J/cm2与34J/cm2两组间无明显差异。(6)IPL对FB细胞Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达影响亚融合状态的成纤维细胞经过强脉冲光照射后,继续孵育24小时,在19J/cm2以前随着能量的增加Ⅰ型胶原蛋白mRNA相对表达增加,与能量成正比,19J/cm2与27J/cm2以及34J/cm2之间比较未见明显差异。强脉冲光可以增加成纤维细胞活力,使处于分裂期的细胞增加,同时PCNA表达上调,同时流式细胞仪技术检测结果显示处于DNA合成期的S期的细胞数明显高于对照组,同时G2-M期细胞比数明显高于对照组,G1期细胞比数明显低于对照组,说明细胞增殖能力增加进入增殖状态的细胞也增加。实验还发现强脉冲光可以促进细胞胶原蛋白的合成及Ⅰ型胶原蛋白mRNA的表达,Ⅰ型胶原基因表达变化与FB胶原合成改变相一致提示强脉冲光对培养FB胶原合成的促进效应可能与Ⅰ型胶原基因表达上调相关,即强脉冲光的胶原合成促进作用机制可能发生在基因转录水平。