广西产地线生药鉴别及体外抗乙肝病毒实验研究

来源 :广西中医学院 广西中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zzuli666
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目的:①对广西产地钱进行进行生药鉴别。②以乙型肝炎病毒(HBV)转染的细胞株2.2.15细胞为靶细胞,观察拳卷地钱总黄酮在该细胞系中对细胞的毒性、HBsAg和HBeAg分泌的抑制作用,同时研究并分析拳卷地钱总黄酮对2.2.15细胞HBV-DNA复制的抑制作用。方法:①以薄层色谱法(TLC)和槲皮素、木犀草素等多种黄酮类对照品,对广西产地钱进行试验性鉴别。②接种2.2.15细胞24h后,加入拳卷地钱总黄酮培养9天,观察细胞病变,用噻唑盐(MTT)比色分析法检测拳卷地钱总黄酮对2.2.15细胞的毒性。③在无毒的药物浓度下,将药物加入2.2.15细胞培养3、6、9天,收集培养液,分别测定HBsAg和HBeAg水平。④将药物加入2.2.15细胞培养9天,提取细胞的DNA,用HBV-DNA探针作斑点杂交,对斑点进行定量分析。结果:①三种地钱的TLC图谱有明显区别。②拳卷地钱总黄酮对细胞的最大无毒浓度为40μg·ml-1;第3、6、9天时,40μg·ml-1的拳卷地钱总黄酮对2.2.15细胞HBeAg、HBsAg分泌抑制率分别为28.53%、28.68%;36.35%、31.45%;44.68%、48.78%,随着时间和剂量的增加,拳卷地钱总黄酮对2.2.15细胞HBeAg、HBsAg分泌抑制作用增强,对HBeAg和HBsAg分泌抑制的半数有效浓度IC50分别为17.11μg·ml-1和17.90μg·ml-1;拳卷地钱总黄酮对HBV-DNA抑制率为31.52%,且呈剂量反应关系。结论:①通过生药学鉴别研究,该TLC可以作为拳卷地钱鉴别方法。②在2.2.15细胞无毒浓度下,拳卷地钱总黄酮对2.2.15细胞HBeAg,HBsAg分泌具有较强的抑制作用;同时可有效地抑制HBV-DNA复制和表达。拳卷地钱总黄酮的抗乙肝病毒作用具有值得一步研究开发和推广应用的价值。
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