论文部分内容阅读
研究目的:本研究旨在探索miR-145与胃癌奥沙利铂耐药的关系。材料与方法:通过浓度递增方法诱导出对奥沙利铂耐药的胃癌细胞株BGC-823/L-OHP,应用MTT法检测两组ICso验证耐药株诱导成功。通过实时定量PCR方法检验野生BGC-823及对奥沙利铂耐药株BGC-823/L-OHP两组细胞的miR-145表达水平,验证miR-145与胃癌细胞奥沙利铂耐药相关性。构建差异表达miR-145的四组BGC-823细胞系(高表达组、低表达组、空载体组、野生组),通过MTT法检测四组细胞对奥沙利铂的半数抑制浓度(IC50),在细胞水平进一步验证miR-145与胃癌细胞奥沙利铂耐药相关性。结果:构建耐药株后,通过MTT实验显示BGC-823细胞株的半抑制浓度(IC50)为8.164ug/ml, BGC-823/L-OHP细胞株的ICso为138.994ug/ml,较前者明显升高,耐药株建立成功。通过病毒向野生BGC-823细胞系中转染靶基因,荧光显微镜下可观察到四组细胞内可见荧光蛋白,成功构建四组差异表达miR-145的胃癌细胞系(高表达组、低表达组、空载体组、野生组),MTT实验结果显示高表达miR-145组IC50为9.861ug/ml,低表达miR-145组ICso为5.377ug/ml,空载体组ICso为5.318ug/ml,野生组ICso为4.805ug/ml,高表达组表现出奥沙利铂耐药性升高。结论:miR-145在BGC-823细胞株与BGC-823/L-OHP田胞株之间表达存在差异,耐药株中表达明显升高;高表达miR-145后,胃癌细胞系BGC-823对奥沙利铂耐药性升高。miR-145可作为预测胃癌奥沙利铂化疗是否敏感的标志物,高表达miR-145的胃癌细胞奥沙利铂化疗敏感性欠佳。