山橿化学成分及质量标准研究

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山橿(三indera reflexa Hemsl)为樟科(Lauraceae)山胡椒属植物,其根可祛风理气、止血,治疗胃痛<'[1,2]>。在河南省民间用于治疗慢性胃炎,胃溃疡等取得了确切的临床疗效。由于其确切的临床疗效和丰富的资源,被收入《河南省地方药材标准》;山檀根为羚锐制药厂“胃痛宁片”的主要原料,主治胃脘胀满,胃寒疼痛,嗳气吞酸及消化性溃疡<'[3]>,已用于临床10余年,取得了显著的临床疗效。但国内外对山檀的研究还很少,“胃痛宁片”也只有薄层色谱法的质量控制方法,为了明确这一临床确有疗效的制剂的有效成分,建立能确切反映该药临床疗效的质量控制方法,从源头上控制药材的质量,对河南省山檀药材资源建立客观、整体和多指标的综合评价体系,实现从源头上控制药材的质量及生药资源的合理开发利用,我们从以下几个方面对其进行了研究。 第一部分:化学成分提取分离与结构鉴定。 采用70%乙醇提取,系统溶剂萃取,得石油醚部位、乙醚部位、醋酸乙酯部位、正丁醇部位、水部位。将乙醚部位拌样上硅胶柱,反复硅胶柱层析及制备薄层层析,正丁醇部位进行Diaion HP-20、ToyopearlHW-40、Sephadex LH-20、硅胶等柱层析及制备薄层层析,结果共分离得到4个化合物。根据化合物的理化性质及<'1>HNMR、<'13>CNMR、<'1>H-<'1>HCOSY、HSQC、HMBC等波谱分析方法,鉴定了2个化合物的结构,分别为:银松素和reflexaeine Ⅰ。 第二部分:山檀的指纹图谱研究。 一、建立了山檀总黄酮的HPLC指纹图谱质量控制标准。色谱条件:色谱柱:依利特Hypersil ODS2 C18(5μm,4.6mm×250mm)色谱分析柱;流动相:甲醇一水,程序性梯度洗脱:0-5min甲醇(50%→65%);5-15min,甲醇(65%→75%);15-40min,甲醇(75%→100%);纯甲醇保持5min。检测波长:297nm;柱温:30℃;流速:1.0mL/min。本实验建立了山檀药材总黄酮的HPLC指纹图谱;并依法测定了23批山檀药材;结果表明:所得的HPLC指纹图谱相似度除了产于河南省西峡县的外均在0.85以上,指纹图谱控制的物质群在药材中得以重现。 二、建立了山檀挥发油气相指纹图谱质量控制标准。色谱条件:HP-5(5%)-二苯基聚硅氧烷共聚物,毛细管柱(320μm×0.25μm,30.0m);检测器:氢焰离子化检测器(FID);检测器温度:240℃;空气流量:300mL/min;氢气流量:30mL/min;载气:氮气;载气流速:1.0mL/min;程序升温条件:65℃持续3min;再以3℃/min,65℃→85℃;1℃/min,85℃→90℃;3℃/min,90℃→99℃;0.2℃/min,99℃→100℃,5.0℃/min,100℃→200℃,200℃持续3min。建立了山檀药材挥发油的气相指纹图谱;并对10批山檀药材进行了气相指纹图谱分析。结果表明:所得的.HPLC指纹图谱相似度除了产于河南省西峡县的外均在0.85以上,指纹图谱控制的物质群在药材中得以重现。第三部分:山檀质量标准的研究。 我们采用性状、显微及TLC法对不同产地,不同生长年限的山檀药材进行定性鉴别研究;并对山檀药材水分、灰分、浸出物、挥发油等常规项进行了测定;以化学成分研究为基础建立了以山橿总黄酮为控制指标的高效液相法指纹图谱,以挥发性成分为控制指标的毛细管柱气相法指纹图谱。结合前期对球松素和银松素的含量测定研究基础,修定了山橿的质量标准。 本研究建立了山檀药材的多指标综合评价体系。对于指导实际生产,监控市场流通,实现山檀药材资源的合理开发利用,保证药品质量的稳定性、有效性和安全性方面具有重要意义。
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