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SIP是从金乌贼(Sepia esculenta Hoyle)墨内分离纯化得到的一种活性较高、结构新颖的多糖。药理学活性研究表明,SIP具有较高的免疫增强、抗氧化和抗肿瘤活性,可通过调节与凋亡有关蛋白的表达来诱导肿瘤细胞凋亡,发挥其抗肿瘤作用。为提高抗肿瘤疗效而不增加毒性,并且降低肿瘤耐药程度,多采用几种抗癌药物联合作用的方式治疗,以发挥药物间的协同作用。顺铂(Cis-dischlorodiammine-platinm,DDP)是一种金属铂类络合物,对大多数肿瘤细胞都有一定的杀伤作用,是一种临床上最常用的化学药物,但当其浓度较高时会对机体有一定毒性作用。乳腺癌(Carcinoma of the breast)是全球女性发病率最高的恶性肿瘤疾病,每年大约有120万妇女罹患乳腺癌,50万人死于乳腺癌,并且这个数字仍在不断上升。癌细胞转移是造成乳腺癌难以彻底治愈的的重要原因,很多患者并不是死于原发性癌症,而是死于后期转移性癌症。本研究采用MDA-MB-231细胞作为体外实验的DDP化疗模型,并利用SIP作为化疗药物DDP的保护剂和增敏剂,观察并分析两种药物单用及联用时对MDA-MB-231细胞转移、凋亡和自噬的影响。实验利用中效原理筛选出合适的用药剂量并对比药物剂量-效应关系;结果发现DDP单独应用时对MDA-MB-231细胞有一定抑制作用,其中效浓度为4.9μg/ml,SIP单独应用时同样对MDA-MB-231细胞具有一定抑制效应,中效浓度为1659.6μg/ml。当DDP与SIP联合作用时,其对MDA-MB-231细胞的中效浓度大大小于两药单用的中效浓度之和。说明两药联用时各药仅需较少剂量便可达到较高抑制效果,减少了DDP单用时产生的耐药性以及对机体造成的毒性损伤。其次依据单细胞克隆实验和细胞伤痕实验从表观上观察药物对细胞迁移能力影响,并根据Western blot结果分析其分子机理,在单细胞克隆和细胞伤痕实验中,DDP与SIP两种药物单用及联用都能对肿瘤细胞的迁移能力有一定抑制作用,虽然SIP的抑制作用弱于DDP,但作为辅助化疗药物DDP的增敏剂,两药联用时其抗转移效果达到最佳与两药单用时相比有极显著差异(P<0.01),western blot实验中SIP+DDP组抑制MMP-2、MMP-9效果均好于两药单用时,可极显著降低两个基质金属蛋白酶的表达。在药物作用过程中,两药相互促进提高抑制肿瘤细胞转移的效果。以Hochest33242/PI双染观察并检测药物对MDA-MB-231细胞凋亡的影响,并根据Western blot结果分析凋亡相关蛋白的表达,从Hochest33242/PI双染检测结果来看,SIP与DDP都能诱导MDA-MB-231细胞发生凋亡,但SIP诱凋亡水平相对DDP较弱,当两药联用时,其促凋亡水平相对两药单独应用时得到极大提升。western blot结果分析,SIP与DDP通过调节Bcl-2/Bax基因比率以及Caspase蛋白酶的表达,介导凋亡现象的发生。利用MDC染色观察药物对MDA-MB-231细胞自噬的影响,并根据Western blot结果分析自噬相关蛋白与PI3K-Akt和p38MAPK信号通路的关键调控因子的表达情况,还初步讨论药物作用下MDA-MB-231细胞发生凋亡与自噬的相互影响及分子机理。由MDC染色结果分析,DDP能够诱导MDA-MB-231细胞自噬,但SIP+DDP组自噬率明显低于DDP组,且两组之间差异显著(P<0.05),由此推断,SIP可一定程度缓解DDP引起的肿瘤细胞自噬。western blot结果分析,与DDP组相比,3-MA+DDP组和SIP+DDP组中,LC3Ⅰ向LC3Ⅱ的转变程度均降低,LC3Ⅱ蛋白表达水平也极显著下降(P<0.01),而Beclin-1蛋白表达水平均也表现为极显著(P<0.01)降低现象。结合凋亡相关蛋白表达与PI3K-Akt和p38MAPK信号通路的关键调控因子p-Akt和p-p38的表达情况来看,DDP能诱导肿瘤细胞发生凋亡和自噬,且可从PI3K-Akt和p38MAPK途径调控,前者可诱导自噬拮抗凋亡,后者自噬和凋亡均可得到促进。SIP可抑制PI3K-Akt以及p38MAPK相关途径,拮抗自噬,并促进细胞凋亡现象进一步发生,从而达到杀死肿瘤细胞的目的。