热休克蛋白70（Heat Shock Protein 70,HSP70）是热休克蛋白家族中的重要成员。大量研究证实:HSP70在蛋白质的折叠、跨膜转运、错误折叠蛋白的降解等方面有重要作用,并与细胞的增殖、分化和神经系统的构建密切相关,而且其表达受环境胁迫和生理胁迫的影响。作为机体重要的保护性蛋白,HSP70在涡虫中尚未见报道。本研究采用RACE技术首次在日本三角涡虫中克隆出hsp70（Djhsp70）全长cDNA序列,并在GenBank注册,登录号EU380241。以基因组DNA和cDNA为模板扩增开放阅读框（ORF）,测序结果相同,说明Djhsp70无内含子。Djhsp70 cDNA全长2066bp,开放阅读框（ORF）1947bp,编码氨基酸648个,分子量71.18kDa。BLAST检索分析发现Djhsp70核苷酸序列与目前已知HSP70家族成员高度同源,氨基酸序列含有真核生物HSP70家族蛋白的三个标签序列（IDLGTTYS、DLGGGTFD、IVLVGG）以及末端的高度保守序列EEVD。这符合报道的HSP70的特征。根据已报道的HSP70的氨基酸序列,构建HSP70亲缘关系树,结果显示涡虫与软体动物门的贻贝最近,靠近脊椎动物,而与线虫和果蝇相距较远。上述结果与涡虫新的分类地位——冠轮动物是一致的。我们采用半定量RT-PCR技术研究逆境胁迫对Djhsp70表达的影响。结果表明:以喂食后一周,18℃培养的涡虫为正常对照。热处理条件下,10℃时表达量较对照组稍有增加,当温度升高至30℃并持续24h,其表达量明显升高,较对照组差异显著（P﹤0.05）;32℃持续48h,表达量达对照组的近两倍。饥饿处理条件下,饥饿15d时表达量较对照组无明显变化,饥饿30d后,表达量显著升高,60d后喂食,表达量迅速降低。切割处理条件下,切割12h时表达量较对照组显著增加（P﹤0.05）,36h时表达量最大,48h时有所降低。由此我们认为,Djhsp70是诱导型hsp70基因,与涡虫的热耐性,抗饥饿以及组织损伤修复密切相关。为进一步研究DjHSP70在组织学上的定位,本实验构建了Djhsp70 C-端多肽原核表达载体,在IPTG诱导下表达出约21kDa的融合蛋白。采用Ni-Agarose树脂对融合蛋白进行纯化,电泳显示纯化的融合蛋白纯度很高,经灰度扫描分析纯度达到95%以上。以纯化的融合蛋白为抗原免疫新西兰大白兔,成功制备兔抗HSP70多克隆抗血清。Western blotting检测显示该抗血清能与涡虫HSP70特异性结合,与其它热休克蛋白无交叉反应,表明该抗体特异性良好。Dlot Blot法测定抗体效价为1:500。利用该抗血清在蛋白水平上进一步检测了热刺激、饥饿诱导以及切割损伤对涡虫HSP70表达的影响,结果与RT-PCR检测结果基本一致。总之,本研究成功克隆了Djhsp70全长cDNA序列,证实了DjHSP70是一个诱导型热休克蛋白,无内含子。在mRNA水平和蛋白表达水平上都证明了HSP70与涡虫的热耐性,抗饥饿以及组织损伤修复等应激现象密切相关。多克隆抗体的成功制备为进一步深入研究HSP70在涡虫组织细胞中的定位以及其它生物学功能奠定了良好的基础。