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[目的]
心肌细胞凋亡是心力衰竭的主要原因,脑利钠肽(BNP)水平可反映心衰的严重程度,BNP和心肌细胞凋亡之间的关系的认识不足限制了BNP的临床应用。本研究利用阿霉素(ADR)致心肌细胞凋亡模型,探讨BNP对大鼠心肌细胞凋亡的影响,为进一步认识临床应用BNP治疗心力衰竭的安全性提供基础研究数据。
[方法]
1.乳鼠心肌细胞原代培养4d。
2.实验分组:Control组:心肌细胞未加药物处理。ADR组:心肌细胞以5mg/LADR进行处理。BNP组:心肌细胞以0.1μmol/L BNP进行处理。BNP+ADR组:心肌细胞分别以0.01μmol/L BNP+5mg/LADR、0.1μmol/LBNP+5mg/L ADR、11μmol/L BNP+5mg/L ADR进行处理。
3.以CCK-8法测定心肌细胞存活率
4.流式细胞仪检测心肌细胞凋亡百分比,荧光显微镜观察凋亡心肌细胞。
5.以caspase-3检测试剂盒测定心肌细胞caspasc-3酶活性,用Bradford法测定总蛋白,计算出每毫克蛋白样品中caspase-3酶活力单位。
[结果]
1.BNP能明显降低大鼠心肌细胞的存活率,与Control组比较差异有统计学意义(P＜0.01),且与ADR有协同作用。其中1μmol/L BNP+ADR组的细胞存活率明显低于0.01μmol/L BNP+ADR组及0.1μmol/L BNP+ADR组,差异有统计学意义(P＜0.01)。
2.BNP能增强大鼠心肌细胞中caspase-3酶活力,与Control组比较差异有统计学意义(P＜0.01)。且与ADR有协同作用,三组不同浓度的BNP+ADR组剂量依赖性地进一步增强caspase-3酶活力,和ADR组比较,差异有统计学意义(P＜0.01)。
3.BNP能诱导大鼠心肌细胞的凋亡,与Control组比较差异有统计学意义(P＜0.01),且与ADR有协同作用,三组不同浓度BNP+ADR组剂量依赖性地增加心肌细胞凋亡,与ADR组比较,差异有统计学意义(P＜0.01)。
[结论]
1.BNP能降低大鼠心肌细胞存活率,在0.01～1μmol/L范围内剂量依赖性地降低ADR作用下心肌细胞的存活率。
2.BNP能增强大鼠心肌细胞中caspase-3酶活力,在0.01～1μmol/L范围内剂量依赖性地增强ADR作用下心肌细胞内caspase-3酶活力。
3.BNP能诱导大鼠心肌细胞凋亡,在0.01～1μmol/L范围内剂量依赖性地增加ADR作用下心肌细胞的凋亡。