苎麻叶黄酮的提取、分离纯化、结构及抗氧化活性的研究

来源 :华中农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ztwpc2008
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苎麻(Boehmeria nivea)为荨麻科苎麻属多年生草本植物,是我国重要的出口创汇经济作物,而苎麻叶作为工业废弃品丢弃,资源浪费严重并污染环境。苎麻叶具有一定药用价值,本文以苎麻叶为原料,对其中的活性成分黄酮类化合物进行提取、分离纯化,结构及抗氧化活性进行研究。1苎麻叶黄酮类化合物提取工艺的优化采用两种方法对“华苎4号”苎麻叶中黄酮类化合物进行提取工艺研究。方法一为乙醇加热回流法,通过对乙醇浓度、料液比、提取时间和提取温度进行正交实验优化,得出最佳的提取工艺条件是:料液比1:60,乙醇浓度70%,提取时间1.5h,提取温度80℃,提取一次。在此工艺条件下苎麻叶(华苎4号)中黄酮类化合物得率为3.76%。方法二采用超声辅助提取法,通过单因素及正交实验,得出最佳的提取工艺条件是:液固比30:1,乙醇浓度70%,超声功率60 W,超声时间30 min,超声温度60℃,提取一次。在此工艺条件下苎麻叶中黄酮类化合物得率为4.94%。采用乙醇加热回流法,通过对8个品种苎麻叶黄酮类化合物得率比较,得出“芦竹青”黄酮得率最高,为6.62%;“华苎5号”黄酮得率最低,为2.74%。通过两种方法比较,超声辅助提取比乙醇提取苎麻叶黄酮类化合物的得率高1.18%,且所用溶剂和时间大大缩短。2苎麻叶黄酮类化合物的分离纯化探讨了四种大孔吸附树脂(AB-8、D101、S-8和聚酰胺)对苎麻叶黄酮吸附的影响。通过静态吸附和解吸实验得出,AB-8树脂的综合性能较佳,有较高的吸附率和解吸率。通过AB-8大孔吸附树脂动态吸附-解析实验,AB-8树脂对苎麻叶中黄酮类化合物的动态洗脱的最佳条件为:溶液pH值为4,上样液浓度为1.508 mg/mL,2 BV的70%乙醇洗脱,洗脱速率为1 mL/min。收集50%乙醇洗脱液,减压浓缩后冷冻干燥,得到苎麻叶黄酮初步纯化物(简称黄酮粗品),黄酮类化合物含量达到29.85%,与上柱前黄酮粗提物比较,提高了5.3倍。葡聚糖凝胶LH-20能有效的分离苎麻叶中黄酮类化合物。将过AB-8树脂的黄酮初步纯化物经乙酸乙酯萃取,萃取液浓缩后过LH-20葡聚糖凝胶柱,分别以30%、50%、70%和90%甲醇洗脱。收集50%甲醇洗脱液和90%甲醇洗脱液,分别得到两种组分RF1和RF2。通过高效液相色谱分析,纯度均达到90%以上。3苎麻叶黄酮类化合物的结构初探通过显色反应和UV,可初步推断纯化后的黄酮样品为黄酮醇类化合物及异黄酮类化合物。通过IR分析,其均具有黄酮类特征官能团。通过HPLC分析六种流动相,得到最佳的流动相为水(pH=3)-甲醇(0.45:0.55)。通过HPLC和GC分析,可初步断定RF1物质为芦丁,组分2(RF2)需要进一步做液相-质谱分析。4苎麻叶黄酮类化合物的抗氧化活性研究了化学模拟体系下苎麻叶黄酮粗品(过AB-8树脂)和纯化样品RF1的抗氧化能力。通过实验得知,IC50Vc<IC50RF1<IC50黄酮粗品,说明总抗氧化能力Vc>RF1>黄酮粗品。总抗氧化能力与浓度呈现良好的量效关系,随着浓度的增大,抗氧化能力逐渐增强,但到一定浓度,抗氧化能力增幅不大,逐渐趋于平衡。实验还表明RF1纯化物的抗氧化能力高于黄酮粗品。结果显示,苎麻叶中黄酮对超氧阴离子、羟基自由基、过氧化氢等均有一定的抗氧化能力。
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