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目的:本课题以中医基础理论为依据,结合现代医学技术,通过实验研究,观察补肾调经汤对 Poretsky 法所致多囊卵巢综合征模型大鼠卵巢颗粒细胞CYP450蛋白表达、血清雄激素(T)、卵巢组织形态学变化的影响,探讨补肾调经汤治疗多囊卵巢综合征的作用机理,为中医药治疗多囊卵巢综合征的有效性提供科学的理论依据。
方法:本课题选用 70 日龄左右的 SPF 级雌性大鼠 70 只为研究对象,适应性喂养 3 天,观察大鼠阴道脱落细胞学变化 10 天,未建立完整动情周期的 10 只大鼠剔除。参与实验的 60 只大鼠,除空白组 12 只每日注射等容积注射用水外,其余动物采用 Poretsky 法(皮下注射胰岛素+HCG)制成多囊卵巢综合征大鼠模型。第23天随机取 8 只,检测阴道脱落细胞涂片、雄激素水平、镜下观察卵巢组织变化,与空白组随机取 2 只对照,以验证模型制作成功与否。模型制作成功后,实验动物被随机分为:模型对照组(模型组)、补肾调经汤高剂量组(简称高剂量组)、补肾调经汤低剂量组(简称低剂量组)、阳性对照组,每组10只。在同种饲养条件下,治疗的同时,正常组、模型组每鼠每日按20ml/kg灌服蒸馏水,高剂量组按每日 38.0g生药/kg灌服;低剂量组按每日 19.0g生药/kg灌服,阳性对照组按每日 0.42g/kg 灌服达英-35,均连续给药 21 天。给药 21 天后,处死大鼠,免疫组化法观察大鼠卵巢颗粒细胞CYP450蛋白的表达情况;放免法检测血清 T 水平;光镜观察卵巢组织形态学的变化。
结果:(1)对大鼠卵巢颗粒细胞CYP450蛋白表达的影响:从阳性区平均积分光密度可知模型对照组均低于其余各组,且有统计学意义(P<0.05或P<0.01);模型对照组与高剂量组、低剂量组、阳性对照组均有差异(P<0.05或P<0.01);高剂量组与阳性对照组有显著性差异(P<0.01);高、低剂量组间比较无差异(P>0.05)。
( 2)对大鼠血清T的影响:统计学处理大鼠血清T水平数据显示,模型对照组睾酮(T)水平显著升高,各治疗组的血清睾酮(T)水平降低,其中尤以高剂量治疗组的血清睾酮(T)水平降低最明显(P<0.01)。
(3)对实验大鼠卵巢组织形态学的影响:正常组卵巢色泽鲜红,组织结构完整,可见多个不同发育阶段的卵泡,成熟的卵泡内可见卵母细胞及放射冠。颗粒细胞呈多层,形态相当完整且排列整齐,卵泡膜细胞呈梭形排列。
模型对照组大鼠卵巢表面苍白,单侧或双侧卵巢体积增大,组织结构相当紊乱,大多数卵泡呈囊状扩张或闭锁状,其中夹杂少许发育正常的卵泡,颗粒细胞层数减少,排列疏松,卵泡膜细胞层及膜间质细胞明显增厚。卵冠丘复合体消失,黄体数量明显下降并伴有不完全的黄素化;给予补肾调经汤高、低剂量及达英-35干预后的三组大鼠卵巢色泽红,体积减小,光镜下卵巢结构较完整,可见不同发育阶段的卵泡及较多黄体,卵泡囊性扩张减少或消失,卵泡内颗粒细胞层数增多,卵泡内可见到卵丘。卵泡膜细胞层较模型组变薄。
结论:补肾调经汤能增强大鼠卵巢颗粒细胞CYP450蛋白的表达,调节大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴的功能趋于稳定,降低高雄激素血症,改善卵巢的组织形态结构,特别是超微结构,从而促进卵泡正常发育,诱发排卵成功。