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目的:探讨瑞香素(DAP)对TNF-α诱导的CIA大鼠成纤维样滑膜细胞(FLS)炎症反应的影响,阐明瑞香素调节NF-κB信号通路减轻炎症反应的分子机制。方法:1.实验分为四组除FLS组外,均用10ng/ml TNF-α诱导30min:FLS组(细胞对照)Model组(TNF-α+FLS--炎症模型组)DAP组(TNF-α+FLS+DAP--实验组)TP组(TNF-α+FLS+TP--阳性药物组)2.瑞香素对TNF-α诱导的CIA大鼠滑膜细胞NF-κB信号通路的调节作用研究(1)Western blot检测瑞香素对TNF-α诱导的CIA大鼠滑膜细胞NF-κB信号通路P65,P-P65蛋白的表达以及磷酸化水平的影响;(2)细胞免疫荧光法观察瑞香素对TNF-α诱导的CIA大鼠滑膜细胞P65,P-P65核内表达情况的影响;(3)Real-time PCR检测瑞香素对TNF-α诱导的CIA大鼠滑膜细胞中IL-6,TGF-β,ICAM-1、IL-10mRNA表达水平的影响;(4)ELISA检测瑞香素对TNF-α诱导的CIA大鼠滑膜细胞培养上清中IL-6,TGF-β,ICAM-1、IL-10分泌情况的影响。结果:1.在蛋白水平检测中发现,Model组中NF-κB信号通路蛋白P-P-65的蛋白量比未经TNF-α诱导的FLS组高,差异有统计学意义。对DAP组与Model组两组比较中发现,加入瑞香素的TNF-α诱导的FLS细胞中NF-κB信号通路蛋白P-P-65的蛋白量比未加入瑞香素的TNF-α诱导的FLS细胞低,差异有统计学意义。2.在细胞核内表达中,TNF-α诱导的Model中NF-κB信号通路蛋白P-P-65核内表达比未经TNF-α诱导的FLS组明显升高。加入瑞香素的TNF-α诱导的FLS细胞中NF-κB信号通路蛋白P-P-65的核内表达比未加入瑞香素后的TNF-α诱导的FLS细胞低。3.在转录水平上,TNF-α诱导的Model组中NF-κB信号通路相关细胞因子IL-6、TGF-β、ICAM-1的mRNA相对表达量比未经TNF-α诱导的FLS组高,差异有统计学意义。加入瑞香素的TNF-α诱导的FLS细胞中NF-κB信号通路相关细胞因子IL-6、TGF-β、ICAM-1的mRNA相对表达量比未加入瑞香素后的TNF-α诱导的FLS细胞低,差异有统计学意义;而IL-10的mRNA相对表达量比未加入瑞香素的TNF-α诱导的FLS细胞高,差异有统计学意义。4.在细胞上清液中,TNF-α诱导的Model组中NF-κB信号通路相关细胞因子IL-6、TGF-β、ICAM-1的分泌量比未经TNF-α诱导的FLS组高,差异有统计学意义。加入瑞香素的TNF-α诱导的FLS细胞中NF-κB信号通路相关细胞因子IL-6、TGF-β、ICAM-1的分泌量比未加入瑞香素的TNF-α诱导的FLS细胞低,差异有统计学意义;而IL-10的分泌量比未加入瑞香素后的TNF-α诱导的FLS细胞高,差异有统计学意义。结论:1.瑞香素(20μg/ml)可显著降低TNF-α诱导的CIA大鼠滑膜细胞P-65、P-P-65蛋白磷酸化水平。2.瑞香素(20μg/ml)可显著降低TNF-α诱导的CIA大鼠滑膜细胞P-65、P-P-65在细胞核内的表达。3.瑞香素(20μg/ml)可显著降低TNF-α诱导的CIA大鼠滑膜细胞中IL-6、TGF-β、ICAM-1 mRNA的表达水平,升高IL-10 mRNA的表达水平。4.瑞香素(20μg/ml)可显著降低TNF-α诱导的CIA大鼠滑膜细胞培养上清中IL-6、TGF-β、ICAM-1的分泌水平,同时升高IL-10的分泌水平。综上,TNF-α可诱导FLS细胞中NF-κB信号通路活化,而加入瑞香素后可降低NF-κB信号通路中P65的磷酸化水平,调节相关炎症因子的分泌,减轻炎症反应。