论文部分内容阅读
目的: 探讨C-Jun氨基末端激酶(JNK)在缺血后处理(IPO)减轻缺血/再灌注损伤大鼠肺细胞凋亡中的作用。 方法: 1.把40只实验的雄性大鼠（体重200～250g）随机分成5组(n=8)，即对照组(C组)、肺缺血/再灌注组(I/R组)、肺缺血/再灌注+缺血后处理组(IPO组)、肺缺血/再灌注+缺血后处理+溶剂对照组（PPCES溶液）（P组）、肺缺血/再灌注+缺血后处理+SP600125组（SP组）。按8ml/kg体重腹腔注射20％乌拉坦麻醉。麻醉后气管插管，连接小动物呼吸机，行机械通气，呼吸机参数设置为:潮气量7-8ml/kg，呼吸频率70b/min，吸呼比3∶2。消毒左胸部皮肤，分离筋膜和肌肉，断开第3、4根肋骨，打开胸腔，暴露左肺，游离左肺门，动脉夹夹闭30min，即为缺血期，松开动脉夹，即为再灌注期，再灌注时间为2h，如此即成功复制在体原位单肺缺血/再灌注模型;再灌注前给予连续的缺血30sec/再灌注30sec的处理共3次，结束后再灌注2h，即为缺血后处理组。C组游离左肺门后不夹闭肺门，观察2.5 h。SP600125用药剂量为10mg/kg体重，将10mg SP600125溶于7.5mlPPCES溶液（30％聚乙二醇，20％聚丙烯乙二醇，15％聚氧乙烯蓖麻油，5％乙醇，30％生理盐水）中[7]，使其充分溶解，缺血前尾静脉注射入大鼠体内。 2.实验后取颈动脉血检测血清超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase，SOD)、丙二醛(Malondialdehyde，MDA)、髓过氧化物酶(Myeloperoxidase，MPO)等生化指标的变化。 3.取肺组织测肺的湿/干重比(W/D)和总肺含水量(total lung water content，TLW)。 4.肺组织光镜检测肺泡损伤数定量评价指标(index of quantitative evaluation foralveolar damage, IQA)。 5.肺组织电镜检测各标本超微结构改变。 6.采用原位末端标记法(TUNEL)检测肺组织凋亡情况，并计算凋亡指数(AI)。 结果: 1.血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、髓过氧化物酶(MPO)的含量 与C组相比，I/R组血清SOD活性显著降低(P＜0.01);MDA含量、MPO活力显著升高(P＜0.01)， IPO组、P组、SP组与I/R组相比，MDA含量、MPO活力显著降低，SOD活性升高(P＜0.05或P＜0.01)，P组与IPO组比较两者均无明显差异（P均＞0.05），SP组与IPO组相比，MDA含量、MPO活力显著降低，SOD活性升高(P＜0.01)。 2.肺组织湿/干重比(W/D)和总肺含水量(TLW)的变化 与C组相比，I/R组W/D和TLW均明显升高(P＜0.01)，IPO组、P组、SP组与I/R组相比，W/D和TLW均明显降低(P＜0.01)，IPO组与P组相比没有统计学意义(P＞0.05)，SP组与IPO组相比，W/D和TLW均明显降低(P＜0.05)。 3.光镜下肺组织形态学的变化及肺泡损伤数定量评估(IQA) 与C组相比，IR组IQA显著升高(P＜0.01);IPO组、P组、SP组与I/R组相比，IQA显著降低(P＜0.01);IPO组与P组相比，IQA没有统计学意义，二者之间没有差别(P＞0.05);SP组与IPO组相比，IQA显著降低(P＜0.01)（见表2）。光镜下，C组肺间质及肺泡结构保持完整，未见炎性细胞及红细胞渗出;I/R组可见肺间质增宽水肿，肺泡结构紊乱，多个肺泡融合，肺泡内炎症细胞浸润且有较多红细胞渗出，偶可见肺部实性变;IPO组与P组肺泡损伤稍减轻，肺泡结构略有紊乱，少量肺泡融合，肺泡内炎细胞及红细胞少量渗出;SP组肺间质水肿不明显，肺泡结构正常，未见肺泡融合，肺泡内极少量炎性细胞及红细胞渗出。 4.电镜下肺组织超微结构的变化 C组内皮细胞和肺泡上皮细胞胞膜完整，核染色质分布均匀，胞内细胞器结构完整，细胞核清晰可见，未见核固缩、碎裂或溶解，肺泡Ⅱ型上皮细胞内板层小体含量丰富，线粒体结构完整;I/R组各型细胞内可见染色质边集，胞内细胞器水肿，偶可见核固缩甚至碎裂、溶解，肺泡Ⅱ型上皮细胞微绒毛脱落，胞内板层小体数量减少，空泡化明显，胞内线粒体肿胀、脊消失;IPO组和P组超微结构损伤有所减轻，肺泡Ⅱ型上皮细胞微绒毛稍增多，板层小体数量尚可，未见明显空泡化，胞内线粒体稍有水肿、脊可见;SP组各型细胞结构完整，和染色质分布均匀，肺泡Ⅱ型上皮细胞微绒毛基本无脱落，胞内板层小体数量接近C组，无空泡化，线粒体未见明显水肿、脊清晰可见。 5.各组细胞凋亡情况及AI值的变化 与C组相比，I/R组凋亡指数显著升高(P＜0.01)，P组、SP组、IPO组AI显著低于I/R组（P均＜0.01），P组与IPO组相比无明显差异(P＞0.05)，SP组显著低于IPO组(P＜0.01)。凋亡细胞主要为肺泡上皮细胞与血管内皮细胞。 结论: I/R导致大鼠肺组织过度氧化应激，激活JNK，肺内中性粒细胞聚集，导致肺组织结构严重破坏，细胞大量凋亡;IPO可以减轻氧化应激，抑制JNK通路的激活，从而改善其结构破坏和细胞凋亡。